E2F因子诱骗阻断对BOO后逼尿肌细胞表型转化影响的实验研究

论文摘要

逼尿肌细胞（DSMC）实质是平滑肌细胞,是一种多能细胞,具备重塑能力,以适应外界环境的变化。平滑肌细胞（SMC）广泛分布于机体多个脏器,其形念和功能差异很大,与所在器官或组织其它细胞成分相互协作,分别适应其生理功能。SMC一般分为增殖型和收缩型两种表型。收缩型,见于成熟的平滑肌细胞,细胞通常呈梭形,具备较强的收缩功能;增殖型,见于生理发育期或病理过程中的平滑肌细胞,细胞形状与成纤维细胞相似,增殖能力旺盛而收缩能力降低。SM-α-actin、增殖细胞核抗原（PCNA）和cdk2激酶是平滑肌细胞表型转化的标志,SM-α-actin表达减少和增殖细胞核抗原（PCNA）、cdk2激酶表达的增加标志着细胞由收缩型向增殖型的转化。 膀胱出口梗阻（Bladder outlet obstruction,BOO）是引起排尿困难、尿失禁、肾功能衰竭等临床症状的最重要的原因,即使去除病因（如通过手术解除梗阻）后,仍然有约35-45%的患者膀胱功能不能恢复甚至继续发生损害。我们前期的研究发现,膀胱功能不能恢复的微观结构基础是平滑肌细胞（逼尿肌细胞）在周期性的超过生理负荷的张力作用下的重塑（表型转化）,即由正常的收缩型表型逐渐转化为增殖表型。 而在细胞表型的转化中,转录因子E2F发挥重要作用:正常时转录因子E2F在G1末期与具备特异结合位点的顺式元件结合,启动其下游c-myc、PCNA、cdk2激酶基因的表达,实现平滑肌细胞的转化、增殖。转录因子诱骗（Transcriptional factor decoy,TFD）即人工合成与DNA分子顺式元件具有一致序列的双链寡脱氧核苷酸,将它转染到活体细胞,竞争性地结合转录因子,阻止转录因子与DNA分子顺式元件特定的区域结合,从而抑制相关基因的表达。 因此,我们从以下三个层次深入研究。第一,根据BOO对膀胱逼尿肌细胞的尿动力学致伤机理,通过对体外培养的逼尿肌细胞施加周期性超负荷牵拉刺激作用,建立细胞水平的BOO生物力学模型,并在此基础上考察细胞在张力负荷下逐渐发生的表型转化（细胞重塑）;第二,先将E2F诱骗寡核苷酸（E2F Decoy ODN）转染入细胞,后实施牵拉,探讨E2F Decoy对张力负荷下DSMC表型转化的预防作用;第三,先实施牵拉,后转染E2F Decoy ODN,探讨E2F Decoy对DSMC增殖表型的逆转作

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• 论文正文 E2F因子诱骗阻断对BOO后逼尿肌细胞表型转化影响的实验研究
• 前言
• 第一部分 细胞水平的BOO模型的建立及张力负荷下的细胞重塑
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 第二部分 E2F因子诱骗对逼尿肌细胞表型转化的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 展望
• 致谢
• 附图
• 参考文献
• 文献综述 转录因子诱骗策略的研究进展
• 参考文献
• 研究生期间发表的主要论文