不同途径移植骨髓间充质干细胞治疗大鼠脑缺血性损伤的实验研究

论文摘要

目的:通过立体定向和尾静脉途径移植大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）到大脑中动脉闭塞模型（MCAO）的大鼠脑内,观察MSCs移植对大鼠缺血性脑损伤后神经功能恢复的作用并探讨其作用机制和比较、筛选移植途径。方法:取体重150gSprague-Dawley大鼠长骨的骨髓细胞,把MSCs分离出来传代和扩增,用FGF-2预诱导24小时,在细胞移植前24小时,在预诱导和未诱导的MSCs中掺入10mg/L的BrdU进行标记,用于动物实验。用改良的Zea Longa线拴法制作脑缺血再灌注模型,并采用大鼠的头MRI检查判断脑缺血的部位和范围。将40只造模成功的SD大鼠随机分为5组,每组各8只。立体定向移植组（Ⅰ、Ⅱ）、尾静脉移植组（Ⅲ、Ⅳ）和对照组（Ⅴ）,其中立体定向和尾静脉组各包括移植预诱导MSCs和未诱导MSCs的两组,对照组仅造模。立体定向移植组和尾静脉移植组在造模1周后分别经立体定向和尾静脉途径将标记Brdu的MSCs（预诱导和未诱导）悬液植入脑缺血大鼠体内,其中立体定向组将MSCs植入患侧的纹状体内。然后进行如下处理:①比较各组大鼠的不同移植时间（1d、2w、1m、2m、3m）的神经功能评分（NSS）的差异②各组大鼠分别于移植后1m、2m、3m三个时间点处死,灌注取脑,固定、包埋、切片。③以Brdu、NSE和GFAP作为增殖、分化的标记物。免疫组化染色方法检测Brdu阳性细胞、Brdu+NSE与Brdu+GFAP的双阳性细胞。检测各组大鼠的BDNF分泌水平。④探讨不同途径移植的MSCs在脑缺血大鼠的脑内的存活、迁移及分化情况,并探讨机制。结果:通过换液、传代,MSCs被分离和纯化,细胞形态为梭形,呈漩涡状。流式细胞仪检测CD90的阳性率为99%,CD34为0.3%,CD31为3.4%,证实了本试验分离培养的细胞为间充质干细胞。用线栓法造MCAO模型后,大鼠表现为线栓动脉对侧的肢体瘫痪,头MRI检测证实造模成功。移植后1d时各组的NSS评分达高峰,各组之间无统计学差异（p＞0.05）,在2w、1m、2m、3m时各移植组NSS评分均低于对照组（p＜0.05）;在2w时尾静脉组的NSS评分低于立体定向组（p＜0.05）;1m时移植组间无统计学意义（p＞0.05）;2m、3m时立体定向移植组的NSS评分低于尾静脉组;2w、1m、3m时预诱导和未诱导组NSS评分无统计学差异（P＞0.05）;2m时预诱导组NSS低于未诱导组（p＜0.05）;免疫组化染色结果发现移植后1个月时各移植组均可见到Brdu+NSE、Brdu+GFAP免疫组化双染阳性细胞,2个月时预诱导组的双染阳细胞多于未诱导组,3个月时各组间无明显差异。立体定向组在梗死侧半球的移植区有较多的Brdu阳性细胞,多分布在针道的周围,对侧半球未见Brdu阳性细胞。尾静脉组见到双侧半球均可见Brdu阳性细胞,梗死侧多于对侧。移植组的BDNF的分泌量明显高于对照组,其中立体定向组又高于尾静脉组（p＜0.05）。结论:MSCs可在体外分离、培养及传代。以立体定向和尾静脉两种途径移植的MSCs可在宿主脑内存活,并且在脑内分化为神经元样细胞及胶质样细胞,改善神经功能。MSCs移植后可促进脑内BDNF的分泌促进MCAO后大鼠神经功能恢复。立体定向途径移植组的效果要好于尾静脉组。

论文目录

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• 符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 对象和方法
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• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述
• 综述正文
• 综述参考文献
• 致谢