山苍子精油对鱼类致病性水霉属真菌的抑制研究

论文摘要

山苍子精油（Litsea cubeba extraction oil,LEO）,是一种具有出色抗氧化和抗菌性能的植物提取物。水霉属真菌带来的疾病是养殖业大患,因此对其的抑制和杀灭研究一直是水霉研究的重点。同丝水霉（Saprolegnia monoica Pringsh）是水霉属的一个重要种,在我国的东北、华北、东南沿海以及内陆省份均有发现。同丝水霉对温度的适应范围很广,几乎终年可见。本文围绕应用山苍子精油抑制同丝水霉的相关问题开展了如下研究：成功培养同丝水霉有性生殖菌丝,并获得大量卵孢子。将美国临床实验室标准化协会（CLSI）的M38方案改进后引入淡水养殖鱼类真菌疾病的药物筛选,并使用该方法确定了12种药物对同丝水霉的最低抑菌浓度（MIC80）：孔雀石绿>二硫氰基甲烷>水杨醛>噻本咪唑>柠檬醛>山苍子精油>LGA>邻苯二甲醛>戊二醛>LM>苦参碱>异噻唑啉酮,且pH对结果的影响大于温度。将同丝水霉菌丝和卵孢子用山苍子精油处理后,通过普通光镜和电子显微镜观察。分析认为：山苍子精油可以有效破坏同丝水霉菌丝的细胞壁和细胞膜的结构,使其出现质壁分离现象,并且对胞内各细胞器具有全方位的破坏能力；对孢子细胞壁的损坏程度较小,破坏萌发所需的营养成分,使孢子失去萌发能力。通过不同药物分别对罗非鱼和鳗鲡96h急性毒性实验,得出药物对参试鱼类的半致死浓度和安全浓度。结果显示药物对罗非鱼的毒性强弱排序为：二硫氰基甲烷>水杨醛>LM>柠檬醛>山苍子精油>LGA；而对鳗鲡：二硫氰基甲烷>水杨醛>柠檬醛>LGA>山苍子精油。亚急性毒性实验选择总抗氧化能力（T-AOC）、还原型谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽-S转移酶（GST）等的含量作为测定实验动物对药物应激反应的指标。结果显示：在低浓度下,山苍子精油对参试鱼类T-AOC指标的影响幅度较小,即对鱼类的整体抗氧化机能不会造成损伤或损伤较小。通过对GST、总谷胱甘肽和GSH的检测发现：在鱼体对山苍子精油的解毒过程中,罗非鱼的鳃受到一定程度的损伤,其鳃组织中GSH的氧化还原代谢途径相对肝脏组织占主导地位；鳗鲡鳃组织中GSH的结合代谢途径相对罗非鱼占更大比重；鳗鲡的鳃和肝脏组织机能均未受到较大影响。总之,无论从药性还是安全性上,山苍子精油都是一种很有开发潜力的抗水霉药物。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 中文文摘
• 目录
• 绪论
• 一. 水霉的生物学特性
• 1. 水霉属真菌的分类地位和分布
• 2. 水霉的形态和生态
• 3. 水霉的生活史
• 4. 同丝水霉
• 5. 水霉以及淡水鱼类水霉病的研究进展
• 二. 山苍子及山苍子精油
• 1. 山苍子及山苍子精油的生物学特性
• 2. 山苍子及山苍子精油的研究概述
• 三. CLSI丝状真菌体外药物敏感性方案研究进展
• 1. M38-A方案简介
• 2. M38-A/P方案的应用延伸
• 四. 动物的抗氧化和解毒保护
• 1. 动物体抗氧化防御系统概述
• 2. 谷胱甘肽S转移酶（GST）和还原型谷胱甘肽（GSH）
• 五. 课题背景
• 第一章 山苍子精油对同丝水霉的体外抑制实验
• 1.1 前言
• 1.2 材料和方法
• 1.2.1 材料
• 1.2.2 方法
• 1.3 结果
• 1.3.1 同丝水霉的分离与孢子的获得和观察
• 1.3.2 体外抑菌实验
• 1.4 讨论
• 1.4.1 有性生殖菌丝与卵孢子
• 1.4.2 定性实验
• 1.4.3 将医学方法应用于水产疾病研究
• 1.4.4 温度和pH对药物抑制卵孢子萌发效果的影响
• 第二章 山苍子精油抑制同丝水霉机制的初步研究
• 2.1 前言
• 2.2 材料和方法
• 2.2.1 材料
• 2.2.2 方法
• 2.3 结果
• 2.3.1 显微观察
• 2.3.2 超微结构观察
• 2.3.2.1 同丝水霉卵孢子的扫描电镜观察
• 2.3.2.2 同丝水霉卵孢子和菌丝的透射电镜观察
• 2.4 讨论
• 2.4.1 山苍子精油的水中性状
• 2.4.2 杀菌机理探讨
• 第三章 山苍子精油对鱼类的毒性研究
• 3.1 前言
• 3.2 材料和试剂
• 3.2.1 实验用鱼
• 3.2.2 试剂和器材
• 3.3 急性毒性实验
• 3.3.1 方法
• 3.3.2 结果
• 3.3.3 小结和讨论
• 3.4 亚急性毒性实验
• 3.4.1 方法
• 3.4.2 结果
• 3.4.3 讨论
• 第四章 结论
• 附录
• 参考文献
• 攻读学位论文期间承担的科研任务与主要成果
• 致谢
• 个人简历