益生菌发酵制备鳕鱼皮鱼皮多肽的初步研究

论文摘要

胶原蛋白多肽是以胶原蛋白为原料,利用酶解法或微生物发酵法生产的多肽产品。与胶原蛋白相比胶原蛋白多肽具有良好的理化性质和生理活性。鳕鱼鱼皮含有丰富的胶原蛋白,且是目前国内主要水产品加工鱼皮下脚料,本文以鳕鱼鱼皮为原料,通过筛选具有分泌蛋白酶、脂肪酶活性和产酸活性的益生菌株进行混合发酵,制备具有较好溶解性和无鱼皮腥味的鱼皮多肽产品。本文通过从纳豆、酒曲、醋曲和海鱼胃肠道中共分离纯化得到104株具有蛋白酶、脂肪酶等酶活力和产酸能力的菌株。通过形态学观察、特殊的细胞结构、运动性等特征和生理生化特性,依据《伯杰氏细菌鉴定手册》、魏景超的《真菌鉴定手册》和《酵母菌的特征与鉴定手册》对微生物进行分类鉴定。同时利用分子生物学技术,对细菌进行了16SrDNA序列测定,以确定其分类地位。根据微生物鉴定结果,从中选出7株具有较高蛋白酶酶活力、脂肪酶活力和产酸能力的菌株,其中2株细菌（BNⅣ-7,JFX 80Y9）,分别为蜡状芽胞杆菌和枯草芽胞杆菌;1株霉菌（H-2）,鉴定为黑曲霉;2株酵母（JQⅡJM白, 4-2大）,鉴定为啤酒酵母和橙黄红酵母;2株产酸菌（fGYY-3,HYW-2）,鉴定为枯草芽胞杆菌。利用复合菌种发酵鳕鱼鱼皮,以水解度为指标,采用单因子试验确定了最适发酵温度、最适接种量、发酵培养基的组成、产酶细菌:霉菌:酵母菌:产酸细菌的比例和发酵时间等发酵参数,通过均匀设计法优化了复合菌种发酵制备鱼皮多肽的发酵工艺。优化实验结果表明,最佳发酵条件为:发酵温度30℃,发酵培养基中鳕鱼皮:水的比例为1:0.5,接种量为8%,产酶细菌:霉菌:酵母菌:产酸细菌的比例为3:1:1:2,发酵时间为20h。此条件下水解度可达38.5%,发酵液气味较香馥,口感较柔和,没有鱼腥味。从发酵液中采用乙醇分离的方法提取鱼皮多肽,并且通过冷冻干燥得到鱼皮多肽粗品,采用凝胶柱进行高效液相层析,得到鱼皮多肽的分子量分布图谱,结果表明,发酵所得到的多肽集中在4000Da以下,小分子量多肽含量较高,发酵效果较好。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 引言
• 1.2 胶原蛋白和胶原蛋白多肽
• 1.2.1 胶原蛋白和胶原蛋白多肽的研究现状
• 1.2.2 胶原蛋白和胶原蛋白多肽的应用
• 1.3 水产品下脚料的加工和利用研究现状
• 1.3.1 鱼头、鱼骨的加工与利用
• 1.3.2 鱼鳞的加工与利用
• 1.3.3 鱼皮的加工与利用
• 1.4 益生菌的研究
• 1.4.1 益生菌的研究现状
• 1.4.2 益生菌的应用
• 1.4.3 益生菌的功能
• 1.5 微生物发酵
• 1.5.1 纯种发酵的优点与缺点
• 1.5.2 混合发酵的优点
• 1.6 本课题研究的立题背景、意义和内容
• 1.6.1 立题背景及研究意义
• 1.6.2 研究内容
• 2 益生微生物的分离纯化
• 2.1 引言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 实验试剂
• 2.2.3 实验仪器及设备
• 2.2.4 实验方法
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 纳豆和豆豉中益生微生物的分离纯化
• 2.3.2 菌肥中益生微生物的分离纯化
• 2.3.3 醋曲中益生微生物的分离纯化
• 2.3.4 酒曲中益生微生物的分离纯化
• 2.3.5 海鱼胃肠道中益生微生物的分离纯化
• 2.4 本章小结
• 3微生物的鉴定
• 3.1 引言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 实验试剂
• 3.2.3 实验仪器及设备
• 3.2.4 实验方法
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 酵母菌的鉴定结果
• 3.3.2 霉菌的鉴定结果
• 3.3.3 细菌的鉴定结果
• 3.4 本章小结
• 4多菌种发酵制备鱼皮多肽工艺的初步研究
• 4.1 引言
• 4.2 材料与方法
• 4.2.1 实验材料
• 4.2.2 实验试剂
• 4.2.3 实验仪器及设备
• 4.2.4 实验方法
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 鳕鱼鱼皮成分测定
• 4.3.2 最适发酵条件确定
• 4.3.3 发酵工艺条件的优化
• 4.3.4 多肽粗品的制备
• 4.4 本章小结
• 5 鱼皮多肽分子量分布的研究
• 5.1 引言
• 5.2 材料与方法
• 5.2.1 实验材料
• 5.2.2 实验试剂
• 5.2.3 实验仪器及设备
• 5.2.4 实验方法
• 5.3 结果与分析
• 5.3.1 分子量标准曲线的绘制
• 5.3.2 鱼皮多肽分子量分布图谱的绘制
• 5.4 本章小结
• 6 总结及展望
• 6.1 论文主要结论
• 6.2 论文的创新之处
• 6.3 展望
• 致谢
• 参考文献
• 附录1 攻读学位期间发表的论文目录