论文摘要
目的：观察黄芪、水蛭大鼠含药血清及有效成分和成分配方抑制体外培养大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增殖作用,并检测其对脂多糖诱导的大鼠GMCs表达血小板源性生长因子-BB （PDGF-BB）的影响,比较益气化瘀药不同含药血清及有效成分和成分配方的作用强度,探讨益气化瘀药肾小球系膜细胞的作用及其抑制系膜细胞增殖的可能机制。方法：运用细胞体外培养的技术,将大鼠肾小球系膜细胞进行体外培养。并借鉴血清药理学的方法,制备不同黄芪、水蛭及其复方含药血清。实验随机分为黄芪高剂量、水蛭高剂量、黄芪高水蛭高剂量、黄芪低水蛭高剂量、脂多糖模型组、黄芪多糖组、黄芪甲苷组、毛蕊异黄酮组、水蛭素组、成分配方组、正常对照组。将不同益气化瘀大鼠含药血清和有效成分及其复方分别加入到脂多糖刺激的体外培养的大鼠肾小球系膜细胞中进行干预,用CCK-8法检测对肾小球系膜细胞增殖作用的影响,并分别采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法、免疫细胞化学法检测肾小球系膜细胞PDGF-BB mRNA、蛋白表达及各组药物对肾小球系膜细胞增殖的影响。结果：①正常组细胞可表达PDGF-BB;②与正常对照组比较,脂多糖刺激后可明显促进PDGF-BB mRNA及蛋白表达增加（P<0.05）；③与脂多糖模型组比较,不同益气化瘀药物含药血清及有效成分和成分配伍均能不同程度抑制PDGF-BB mRNA及蛋白表达（P<0.05）；④与黄芪高剂量组比较,黄芪多糖组PDGF-BB mRNA表达有明显增加（P<0.01）；与水蛭高剂量组比较,黄芪高剂量水蛭高剂量和水蛭素组抑制作用较强（P<0.05）,黄芪低水蛭高剂量组的抑制作用不明显（P>0.05）⑤益气化瘀药能够不同作用的影响GMCs的增殖,各含水蛭成分组的抑制增殖作用比较明显（P<0.05）,并且随着黄芪和水蛭剂量的增加而逐渐增强（P<0.05）,呈一定的剂量效应依赖关系。结论：①脂多糖可刺激GMCs的增殖,导致系膜细胞中PDGF-BB mRNA及蛋白表达上调,提示PDGF-BB参与了系膜增生性肾小球肾炎（MsPGN）肾损害的发病过程。②不同益气化瘀含药血清及有效成分和成分配方组均可下调PDGF-BB mRNA及蛋白表达。通过黄芪含药血清组与其有效成分的作用比较,认为黄芪多糖组较黄芪高剂量组的mRNA表达有明显增加,说明了黄芪有效成分作用均不如含药血清；通过水蛭含药血清组与水蛭素组比较,认为水蛭素组抑制作用更强,然而,无论是含药血清或是有效成分,研究总体表明水蛭和以水蛭为主的配方强于黄芪和以黄芪为主的配方,说明了重视益气化瘀含药血清的应用比其有效成分的单一应用的研究,更有利于延缓系膜增生性肾病肾小球硬化（GS）的进展。③从细胞分子生物学层次探讨益气、化瘀药及不同复方对肾小球系膜细胞增殖的可能作用机制,为临床益气化瘀中药的科学应用提供实验依据。
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标签：黄芪论文; 水蛭论文; 脂多糖论文; 肾小球系膜细胞论文; 血小板源性生长因子论文;