应用蚕豆根尖微核技术检测不同品种茶叶遗传毒性

应用蚕豆根尖微核技术检测不同品种茶叶遗传毒性

查艳景刘莉

(曲靖医学高等专科学校云南曲靖655000)

【中图分类号】R114【文献标识码】B【文章编号】1672-3783(2015)06-0201-01

【摘要】:本文应用蚕豆根尖微核检测茶的遗传毒性方面作了一些研究。以不同品种(绿茶Ⅰ、绿茶Ⅱ、红茶、普洱生茶、普洱熟茶)不同泡数(洗茶汤、一泡茶汤、二泡茶汤)的茶汤处理为实验组,蚕豆根尖细胞微核率的大小表示茶叶遗传毒性的大小。实验表明,茶汤具有一定的遗传毒性。同一品种不同泡数的茶汤处理后,微核率不同(洗茶汤>一泡茶汤>二泡茶汤)。绿茶Ⅰ的遗传毒性低于绿茶Ⅱ的遗传毒性,且差异性显著(P=0.03775,P<0.05),普洱生茶与普洱熟茶的遗传毒性相当,差异性不显著(P=0.225403,P>0.05)。

【关键词】:微核试验;微核率;污染指数;农药残留;遗传毒性

一、研究目的与意义

近代科学研究表明,茶叶中含有丰富的营养成份以及多种对人体健康有益的物质,这些营养成分是人体正常生长发育所必须的,并可以帮组人体预防和治疗某些疾病,如茶中含有大量的维生素C可降低胆固醇值,茶叶可预防糖尿病。市场上有许多茶产品,如佳洁士茶爽牙膏、茶多酚片、绿茶洁面乳等。

茶叶是日常生活的必需品,也是我国重要的传统出口商品,但随着人们生活水平的提高,对食品安全问题越来越重视,茶叶中农药残留问题已经成为国际贸易中的技术焦点,各国都制定了茶叶中的农药残留限量标准,检测项目不断增加,要求日趋严格。我国茶叶出口屡遭农药残留超标困扰,农药残留超标问题已经成为我国茶叶出口的一道关卡。

二、实验材料与方法

2.1实验材料

实验材料:松滋青皮豆。

茶叶的品种:绿茶Ⅰ,绿茶Ⅱ,红茶,普洱生茶,普洱熟茶,这些茶叶都是2014年的春茶,在市场上随机购买。

2.2研究方法

基本按照《水和废水监测分析方法》进行,并做部分改进。

2.3实验步骤

2.3.1制备蚕豆根尖

(1)实验材料的培育

购松滋青皮豆种子,晒干贮藏于干燥器内或4℃冰箱内备用。

(2)实验材料的选择

将蚕豆从4℃的冰箱中取出,在室温(20℃-25℃)下放置48h,选择颗粒饱满、大小均匀、胚芽无损坏、没有被虫食用的蚕豆干种子。

(3)浸种催芽

将选出的蚕豆放入底部垫洁净纱布的解剖盘中,在解剖盘中加入适量的蒸馏水,淹没蚕豆的3/4即可,置于室温下培养24h,此间换水3次。种子充分吸胀萌发后,移至解剖盘中覆盖纱布以保持湿度,室温培养。待根长至1-2cm左右时,选择320个初生根尖生长良好、根长一致的蚕豆种子,随机分成16组,每组20个备用。

2.3.2处理蚕豆根尖

将上述备用蚕豆留下其中1组用蒸馏水培养作对照组,其余15组分别用受试液培养,处理24小时,每隔8h换一次水。

2.4.3蚕豆根尖的恢复培养

将经各受试液处理过的根尖,用蒸馏水浸洗3次,每次2-3min,将洗净的种子再放入底部垫有纱布培养皿中,盖上纱布在室温下保湿恢复培养24h。

2.4.4蚕豆根尖的固定与保存

将恢复培养后的蚕豆,剪下根尖1cm-1.5cm,用卡诺固定液固定24h。将固定后的蚕豆根尖用90%酒精浸洗半小时,再用70%的酒精浸洗半小时,然后放入70%的酒精中置于4℃冰箱中保存,酒精的体积约为根尖的15倍。

2.4.5解离蚕豆根尖

先用蒸馏水浸洗根尖1-2次,然后再用卡诺固定液固定一次,时间3-5分钟;将固定好的蚕豆根尖用蒸馏水浸洗2次,每次5min,若根尖在冰箱中的储存时间短则不需要再次固定。用1mol/L盐酸于50℃水浴箱中解离根尖5min,再用蒸馏水浸洗2次,每次5min。

2.4.6徒手制片

取出根尖置于擦净的载玻片上,用解剖针截取2cm左右根尖分生组织(解离后稍透明部位),用解剖针将其捣碎并均匀的涂开,滴上1-2滴卡宝品红染液,盖上盖玻片,染色5-10min后压片。

2.4.7蚕豆根尖的镜检及微核识别标准

制备好的装片置于显微镜上观察,每个待测液培养的根尖装片及对照组装片至少分别镜检10个根尖,每个根尖装片在高倍镜下观察10个视野,每个视野中大约100个细胞,每个装片统计约1000个细胞中的微核数,并做记录。

微核识别标准:(1)大小为主核的1/3-1/15,且于主核分离;(2)着色与主核相当或稍浅;(3)形态为圆形、椭圆形、不规则形。

3实验结果

由下图可知,这五种(绿茶Ⅰ、绿茶Ⅱ、红茶、普洱熟茶、普洱生茶)茶叶洗茶汤MCN‰都高于各自相对应的一泡茶汤的MCN‰,而一泡茶汤又高于相对于的二泡茶汤的MCN‰。红茶洗茶汤、一泡茶汤、二泡茶汤的微核率都高于其它品种对应的MCN‰;绿茶Ⅰ洗茶汤、一泡茶汤、二泡茶汤的微核率都低于其它品种对应的MCN‰。绿茶Ⅰ的微核率比绿茶Ⅱ的微核率低,差异显著(P=0.03775,P<0.05);普洱熟茶与普洱生茶的微核率相差不大,差异性不显著(P=0.225403,P>0.05)。

4结论

(1)通过实验结果分析可知,每个实验组的微核率与对照组相比明显较高,大部分都是中度污染,由此可见,所检测的几种茶叶中都有一定程度的遗传毒性。

(2)实验结果分析得出:同一品种的茶汤从洗茶汤、一泡茶汤到二泡茶汤微核率有下降趋势,茶汤导致微核率由高到低依次为:洗茶汤、一泡茶汤、二泡茶汤,在喝茶时洗茶是必要的。

(3)实验结果分析得出:绿茶Ⅱ的微核率比绿茶Ⅰ的微核率高,且差异显著(P=0.03775),说明品质好的茶叶的遗传毒性较低。

(4)实验结果分析得出:普洱熟茶与普洱生茶的微核率相差不大,差异不显著(P=0.225403),说明普洱熟茶和普洱生茶的遗传毒性相当。

参考文献

[1]帅素容.普通遗传学实验教程[M].成都:四川科学技术出版社,2003:76-80.

[2]王大宁,董益阳,邹明强.农药残留检测与监控技术[M]北京:化学工业出版社,2006:1,5-6.

[3]钱传范.农药残留分析原理及方法[M].北京:化学工业出版社,2011:6-11,382.

[4]朱永兴,张有炯,黄永生.中国茶与养生保健[M]济南:山东科学技术出版社,2008:20-21.

[5]廖义荣.品味普洱[M].昆明:云南科技出版社,2005:34.

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