论文摘要
将不同模式“液质”联用技术,包括:高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱（HPLC-ESI-TOF/MS）,高效液相色谱-大气压化学电离质谱（HPLC-APCI-MS）,高效毛细管电泳-电喷雾飞行时间质谱（HPCE-ESI-TOF/MS）,超高效液相色谱-电喷雾串联质谱（UPLC-ESI-MS/MS）等,用于采用普通分析方法难以测定的复杂天然药物研究中,并成功建立快速分析、鉴别陆源及海洋药用生物中活性成分的方法学,以解决几种典型陆源和海洋天然药物已知、未知活性成分鉴别困难的难题,为我国陆源及海洋天然药物现代化研究进程的加速提供强大的技术推动力。本文研究内容与所得结果如下:第一章,对我国中药现代化、海洋药物现代化研究以及不同色谱-质谱联用技术相关的概念、理论和国内外研究现状进行了简要的介绍和评述。第二章,加速溶剂萃取技术（ASE）是近年来发展起来的一种全新的萃取技术,具有自动化程度高、萃取时间短、溶剂用量少、萃取效率高等显著特点。目前已逐渐应用于中药现代化研究领域,成为中药有效成分色谱分析样品前处理的强有力手段。本章首次将ASE用于中药材娑罗子和黄连有效成分的提取研究。首先,探讨ASE提取娑罗子中七叶皂苷的可行性,并比较该方法相比于回流和超声提取法的优越性。以娑罗子中四种七叶皂苷的提取率为指标,采用HPLC法测定,用单因素考察法对ASE从娑罗子中提取七叶皂苷的工艺条件进行优化。其次,以黄连中四种主要生物碱的提取率为评价指标,采用正交设计实验对ASE从黄连中提取生物碱的工艺条件进行优化,并与回流和超声提取法进行比较;对比实验结果表明ASE提取法四种主要生物碱提取率均高于传统方法。由此可知,ASE是娑罗子皂苷及黄连生物碱类化合物快速、高效提取的有效方法。第三章,采用HPLC-ESI-TOF/MS对中药材娑罗子和莲子心中的活性成分进行分析。首先,建立娑罗子中4种主要七叶皂苷定量测定的HPLC-UV方法,探讨4种七叶皂苷电喷雾质谱分析裂解规律,并对娑罗子中的其他七叶皂苷类化合物进行鉴别。在选定的色谱条件下,七叶皂苷类化合物得到较好分离,方法的精密度、重复性、稳定性均良好。通过ESI-TOF/MS分析获得娑罗子中各皂苷成分的精确分子量和分子式,采用质谱碰撞诱导解离技术获得各化合物碎片裂解信息,从而阐明了4种主要七叶皂苷的电喷雾质谱裂解规律,结合文献还对娑罗子中的14种皂苷类化合物进行了初步鉴定。其次,建立了ASE-HPLC-DAD-ESI-TOF/MS分析莲子心中生物碱类化合物的方法,在选定的最佳仪器条件下,鉴定了莲子心提取物中的6种生物碱。本章研究结果表明HPLC-ESI-TOF/MS是娑罗子皂苷类化合物、莲子心生物碱类化合物快速鉴别的有效工具。第四章,率先将HPCE-ESI-TOF/MS用于分析黄连中的8种生物碱类化合物。使用未涂层石英毛细管,优选出3种不同运行电解质溶液,并对联用技术的仪器工作条件进行了优化。在优化所得的最佳仪器条件下,使用3种运行缓冲溶液,进行黄连提取物的HPCE-DAD分析,黄连中的8种生物碱均能获得良好的分离结果;进行黄连提取物的HPCE-ESI-TOF/MS分析,能对黄连中的8种生物碱进行快速鉴别。此外,还建立了黄连中3种主要生物碱（小檗碱、巴马汀、药根碱）的HPCE-DAD测定方法,该方法的精密度、重复性、稳定性均良好。综上所述,说明HPCE-ESI-TOF/MS联用技术是快速分析鉴定黄连中生物碱类化合物的强有力工具,在中草药生物碱类化合物鉴定研究中具有很强的适用性。第五章,首次采用UPLC-ESI-MS/MS对黄连中生物碱类化合物进行分析。实验采用BEH C18色谱柱,以乙腈-水（含0.5%的乙酸和20 mmol/L的乙酸铵）为流动相,梯度洗脱,UV 350nm检测,能获得较好的分离结果,可作为黄连药材中生物碱类化合物含量测定的检测方法。采用ESI-MS/MS对黄连提取物中的生物碱类化合物进行鉴别,通过获得各生物碱的一级、二级质谱图,推测各生物碱的质谱裂解规律,结合相关文献,可对黄连中的8种生物碱进行了快速鉴别。另外,还建立了ESI-MS/MS测定黄连中3种生物碱的分析方法,结果表明,MS/MS检测器的灵敏度明显高于PDA检测器,更高于第四章发展的HPCE-DAD法,适于低浓度黄连生物碱的分析测定研究。此外,还对黄连生物碱UPLC指纹图谱进行了探索,UPLC指纹图谱和HPLC指纹图谱相比,大大缩短了指纹图谱的分析时间,有望解决HPLC指纹图谱分析时间过长的难题。第六章,采用HPLC-APCI-MS对烟叶、灵芝和川芎中的活性成分进行分析研究。首先,建立烟叶中茄尼醇定量测定的HPLC-UV分析方法,烟叶样品进行皂化及超声提取处理后,采用反相HPLC进行测定;结果表明,该方法操作简便、灵敏度高,重现性好,可作为烟叶中茄尼醇含量的检测方法。另外,对茄尼醇APCI-MS分析条件进行了系统优化,建立了HPLC-APCI-MS测定茄尼醇的方法,并与ESI-TOF/MS进行了比较;通过对茄尼醇的ESI-TOF/MS和APCI-MS的质谱分析特征比较可以发现,茄尼醇在ESI源分析中的信号强度远远小于在APCI源分析中的信号强度,说明APCI源更适于茄尼醇的定量分析。其次,采用HPLC-DAD和HPLC-APCI-MS对灵芝中含有的三萜类化合物进行了分析。用DAD检测器记录各个色谱峰的紫外吸收光谱,采用APCI-MS进行在线同步分析,记录总离子流色谱图（TIC）和各个色谱峰的质谱图,通过紫外光谱及质谱分析并与文献对照初步鉴定了灵芝中的32个三萜类成分。再次,建立川芎生药HPLC特征指纹图谱分析方法,并采用HPLC-DAD-APCI-MS对川芎提取物中活性成分进行快速鉴定。结果表明,本文所发展的色谱方法精密度、重复性、稳定性良好,采用APCI-MS共计鉴定出川芎甲醇提取物中10种有效成分。综上所述,HPLC-APCI-MS是天然产物中极性较小,电喷雾质谱不易分析的化合物测定的有力工具。第七章,采用体外DPPH（1,1-二苯基苦基苯肼）抗氧化模型对海马提取物的抗氧化性质进行评价,并建立小海马HPLC特征指纹图谱,用于小海马药材的鉴别及质量评价。首先,利用离线DPPH抗氧化评价体系,对海马不同提取物清除DPPH自由基的能力进行比较,结果表明海马水提物清除DPPH自由基的能力最强,在此基础上又探明了海马水提物清除DPPH自由基能力随时间和浓度的变化规律,为海马抗氧化活性提供了科学依据。其次,依据抗氧化活性实验结果,建立了海马水提物HPLC特征指纹图谱分析方法;在选定的最佳色谱条件下,海马水提物大部分化合物达到基线分离,方法的精密度、重复性、稳定性良好;对10批小海马样品进行分析,建立小海马药材HPLC指纹图谱,采用中药指纹图谱相似度计算软件,对小海马进行真伪辨别和质量评价,结果表明该方法简捷、有效,是小海马药材鉴别及质量控制的有效方法。第八章,将基于HPLC在线清除DPPH?自由基活性快速筛选自由基清除剂的方法与ESI-TOF/MS结合,发展一种复杂天然产物中抗氧化活性成分在线筛选、鉴别的技术体系,并用于中草药金银花、海洋药物海马提取物中抗氧化活性成分的快速筛选、鉴别。本章所发展的HPLC -ESI-TOF/MS-DPPH技术体系,适用范围广、简单,可靠,还可以用于评价抗氧化成分的抗氧化效果。利用该方法从金银花醇提物中筛选出4种具有明显抗氧化活性的化合物,结合文献和数据库可对其进行鉴定;从海洋药物小海马中筛选出一种具有明显抗氧化活性的化合物,为海马水提物抗氧化活性提供了更可靠的科学依据。通过以上研究,本文针对不同天然药物所含活性成分的结构特点,发展了多种色谱-质谱联用技术,解决了几种典中药（娑罗子、莲子心、黄连、灵芝、川芎等）及海洋药物小海马研究中存在的一些难题,为陆源中草药及海洋药物活性成分的快速分离、鉴别、筛选、测定提供了一系列新方法。此外,探索了ASE用于天然药物微量有效成分提取的可行性,证明了ASE在天然药物成分色谱分析样品前处理研究领域,具有很强的实用性。
论文目录
相关论文文献
- [1].第十四届海洋药物学术年会暨2019国际海洋药物论坛召开[J]. 中国海洋药物 2019(06)
- [2].第十三届海洋药物学术年会暨2017国际海洋药物研讨会第二轮通知[J]. 中国药学杂志 2017(19)
- [3].厦门海洋药物产业现状与发展对策初探[J]. 渔业研究 2016(02)
- [4].搏浪撷珍会有时,制得灵药谢众生 海洋药物研发[J]. 人与生物圈 2020(01)
- [5].海洋药物知多少[J]. 初中生必读 2020(Z2)
- [6].悠久的海洋药物应用历史[J]. 人与自然 2014(06)
- [7].海洋药物一览[J]. 海洋与渔业 2019(03)
- [8].广西科学技术出版社倾力打造中国第一部研究区域性海洋药物的专著《广西海洋药物》[J]. 广西中医药 2009(06)
- [9].海洋药物及其研发进展[J]. 中国海洋药物 2018(03)
- [10].心系苍生 问药“蓝色国土”——记上海海洋大学海洋药物教研室主任吴文惠教授[J]. 科学中国人 2011(21)
- [11].海洋药物研发知识升华模型研究[J]. 知识经济 2010(10)
- [12].国际海洋药物研究动态与发展趋势[J]. 海洋科学 2018(10)
- [13].探秘海洋药物的管华诗[J]. 科技创新与品牌 2020(05)
- [14].热带特色海洋药物研究团队[J]. 热带生物学报 2016(02)
- [15].第十二届海洋药物学术年会暨第三届海洋药物博士论坛通知(第一轮)[J]. 中国药学杂志 2015(11)
- [16].开创海洋药物研发新路 引领中国海洋制药业发展[J]. 中国高校科技与产业化 2010(03)
- [17].基于海洋药物特色的药理学教学改革与实践[J]. 科教导刊(上旬刊) 2018(08)
- [18].国外海洋药物发展概况[J]. 中国组织工程研究与临床康复 2011(42)
- [19].书讯[J]. 中国海洋药物 2009(03)
- [20].第十二届海洋药物学术年会暨第三届海洋药物博士论坛通知(第一轮)[J]. 中国药学杂志 2015(12)
- [21].第十二届海洋药物学术年会暨第三届海洋药物博士论坛通知(第一轮)[J]. 中国药学杂志 2015(10)
- [22].第十一届海洋药物学术年会在海口市召开[J]. 中国药学杂志 2013(21)
- [23].北部湾之情,濒湖山人之志——读《广西海洋药物》[J]. 广西中医药 2010(02)
- [24].我国将开发海洋药物对抗艾滋病和肿瘤[J]. 山东中医药大学学报 2009(05)
- [25].中职海洋药物制造与营销专业课程体系建设的改革探讨[J]. 职业 2013(14)
- [26].天然药物化学课程中“海洋天然产物”章节的教学实践[J]. 基础医学教育 2014(05)
- [27].海洋抗肿瘤活性物质研究进展[J]. 科技视界 2013(27)
- [28].把握海洋药物研发的历史机遇[J]. 中国海洋药物 2013(01)
- [29].海胆的化学成分及药理活性研究概况[J]. 中国药师 2008(01)
- [30].《海洋药物学》特色教育浅谈[J]. 管理观察 2014(05)
标签：中药论文; 海洋药物论文; 抗氧化论文; 加速溶剂萃取技术论文; 高效液相色谱论文; 高效毛细管电泳论文; 超高效液相色谱论文; 电喷雾飞行时间质谱论文; 大气压化学电离质谱论文; 串联质谱论文; 指纹图谱论文;