奶牛基因变异及其对泌乳性状影响的分析以及脊椎畸形综合症检测技术的建立

论文摘要

奶牛的泌乳性状是奶牛养殖业中重要的经济性状,泌乳量的高低和品质的优良直接影响养殖的生产效益。本研究分别选择了与乳房发育或调节生长发育相关的4个候选基因（催乳素基因（PRL）、垂体特异性转录因子1（POU1F1）、雌激素受体α（ERα）和细胞因子信号抑制蛋白-2（SOCS-2））作为研究对象,采用了DNA测序、PCR-RFLP、引入酶切位点等技术,在4个候选基因中,设计了12对引物进行SNP检测,共检测出了6个SNP变异位点;建立了6个SNP变异位点的检测方法;检测了270头荷斯坦奶牛的5个SNP位点的多态性;初步筛选出了3个SNP位点与产奶量显著相关,1个SNP位点与乳脂率显著相关;建立了影响奶牛产奶量和健康的脊椎畸形综合症的分子生物检测技术,并利用基因测序方法对该技术进行了验证,在150头奶牛中进行了检测应用,该技术可用于奶牛遗传有害基因的检测。主要研究结果如下:1.与乳房发育或调节生长发育相关的4个候选基因的外显子中,检测出了6个SNP位点。奶牛PRL基因中检测到两个2个SNP位点,POU1F1基因中检测到1个SNP位点,ERα基因中检测到1个SNP位点,SOCS-2基因中检测到2个SNP位点。2.采用DNA测序方法共发现了4个新SNP位点。在PRL基因中发现了1个新的SNP位点;在ERα基因中发现了1个新的SNP位点;在SOCS-2基因中发现了2个新的SNP位点。3.建立了5个SNP位点的变异检测技术。分别为PRL基因外显子3的PCR-RsaⅠ-RFLP、PRL基因外显子5的PCR-AciⅠ-RFLP;POU1F1基因外显子6的PCR-HinfⅠ-RFLP;ERα基因外显子2的PCR-DraⅠ-RFLP;SOCS-2基因外显子4的PCR-HinfⅠ-RFLP、PCR-BsiYⅠ-RFLP基因分型方法。4.在4个候选基因中,有5个SNP位点在荷斯坦奶牛中均存在多态性。5.初步筛选出了3个SNP位点与产奶量显著相关。分别为POU1F1基因外显子6的PCR-HinfⅠ位点、ERα基因外显子2的PCR-DraⅠ位点、SOCS-2基因外显子4 PCR-BsiYⅠ位点6.初步筛选出了1个SNP位点（POU1F1基因HinfⅠ-RFLP位点）与乳脂率显著相关。7.建立了脊椎畸形综合症的分子生物学检测方法,并对该技术进行了验证和应用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略词表
• 1 文献综述
• 1.1 前言
• 1.2 奶牛分子标记及其辅助选择
• 1.2.1 分子标记概述
• 1.2.2 分子标记辅助选择
• 1.3 奶牛产奶量相关QTL和基因的研究状况
• 1.3.1 奶牛产奶量相关微卫星等标记及QTL
• 1.3.2 奶牛产奶量相关基因的研究现状
• 1.4 奶牛隐性遗传疾病相关基因的研究状况
• 1.4.1 脊椎畸形综合症（CVM）
• 1.4.2 牛尿苷酸合酶缺乏症（DUMPS）
• 1.4.3 奶牛进行性脑脊髓退化症（PDME）
• 1.4.4 奶牛白血球粘连缺乏症（BLAD）
• 2 研究的目的和意义
• 3 四个基因的SNP检测和产奶量的关联分析
• 3.1 材料
• 3.2 试验方法
• 3.2.1 DNA的提取
• 3.2.2 基因组DNA质量和浓度的检测
• 3.2.3 PCR引物的溶解、反应程序、产物检测和PCR-SSCP分析
• 3.2.4 PCR产物的克隆回收测序
• 3.2.5 分子生物学软件和数据分析软件
• 3.2.6 分子标记位点的统计分析方法
• 3.2.7 数据统计分析方法
• 3.2.8 四个候选基因SNP筛选及SNP检测
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 牛PRL基因SNP位点及其与产奶量关联分析
• 3.3.2 牛POU1F1基因SNP位点及其与产奶量关联分析
• 3.3.3 牛ERα基因SNP位点及其与产奶量关联分析
• 3.3.4 牛socs-2基因SNP位点及其与产奶量关联分析
• 3.4 讨论
• 3.4.1 环境因素对奶牛产奶性能的影响
• 3.4.2 引物的选择
• 3.4.3 PCR-SSCP对基因多态性的检测
• 3.4.4 候选基因多态性和性状关联分析
• 4 脊椎畸形综合症（CVM）的检测技术的建立、验证及其应用
• 4.1 试验材料
• 4.2 CVM检测技术的建立
• 4.3 CVM检测技术的验证
• 4.4 脊椎畸形综合症（CVM）的检测技术的应用
• 4.5 讨论
• 5 小结
• 5.1 本研究的主要结论
• 5.2 本研究的创新点
• 5.3 本研究的不足与下一步研究
• 参考文献
• 附录
• 致谢