初筛调控残粒脂蛋白诱导的小鼠内皮祖细胞衰老的miRNA

论文摘要

背景内皮祖细胞（Endothelial progenitor cells, EPCs）是成熟血管内皮细胞的前体细胞,参与血管再生和内皮损伤后的修复过程。EPCs衰老及其功能紊乱可致血管内皮功能失调,后者与动脉粥样硬化的发生、发展密切相关。餐后阶段被认为是致动脉粥样硬化的关键时期。餐后高甘油三酯血症患者血浆中增多的残粒脂蛋白（Renmant-like particles, RLPs）与血管内皮功能失调密切相关,可加速人外周血单个核细胞来源EPCs的衰老进程,但其机制尚不明确。微小RNA （microRNA, miRNA）是一类在进化过程中高度保守的内源性非编码单链RNA,对真核生物的基因表达发挥重要的调控作用。最近发现miRNA参与调控细胞衰老。推测：miRNA可能参与调控RLPs诱导的EPCs衰老。目的观察RLPs对小鼠骨髓源性EPCs衰老的影响,筛选可能调控RLPs诱导的EPCs衰老的miRNA。方法通过密度梯度离心法从小鼠骨髓中分离单个核细胞,经差速贴壁结合特殊培养基扩增,诱导分化为EPCs。应用流式细胞技术鉴定内皮细胞系列标志：CD34、CD31、Flk-1和祖细胞标志CD133。以0.1mg/mL RLPs刺激EPCs为实验组,以等体积PBS刺激EPCs为对照组,分别孵育12h、24h、48h、72h,衰老相关β-半乳糖苷酶（Senescence-associatedβ-galactosidas, SA-β-gal）染色鉴定各组细胞衰老的情况。miRNA微阵列技术筛选衰老EPCs中表达显著变化的miRNA.结果经密度梯度离心和差速贴壁法分离所得的细胞经EBM-2专用培养基培养后,第4d可见集落形成,培养到第12d行流式细胞仪检测其CD34、CD 133、Flk-K1、CD31的阳性率分别为（65±4）%、（48±3）%、（37±3）%和（51±4）%。RLPs显著增加衰老EPCs细胞数。EPCs衰老数量在RLPs作用24h开始显著增多,48h的组间差异最明显。miRNA微阵列技术筛选出衰老EPCs中表达差异>2倍的miRNA有5个：表达显著上调的miRNA有1个,为miR-542-3p;表达显著下调的miRNA有4个,即miR-328, miR-324-5p, miR-27b, miR-191。结论经RLPs诱导的衰老小鼠EPCs中有5个表达差异>2倍的miRNA,它们可能参与调控RLPs诱导的EPCs衰老。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略语
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 第三章 结果
• 3.1 EPCS的培养及鉴定
• 3.2 RLPs蛋白浓度
• 3.3 RLPs促进EPCs衰老
• 3.4 总RNA质量分析结果
• 3.5 miRNA微阵列芯片表达谱分析
• 3.6 差异表达结果的可靠性分析
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 已发表和己接受的论文