论文摘要
氯霉素（chloramphenicol,CAP）在食品中的残留导致了许多恶性疾病,并对人体产生严重危害。美国、加拿大、欧盟和中国等许多国家规定了CAP在所有食品动物的可食用组织中不得检出,所以建立一种高灵敏的检测方法十分必要。时间分辨荧光免疫分析方法（Time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA）是近十年发展起来的一种新兴的非放射性免疫标记技术,具有灵敏度高、特异性强、重复性好等优点,并且非常适合大规模样品的筛选。本论文旨在建立高灵敏的、快速检测CAP时间分辨荧光免疫分析方法（CAP-TRFIA）。将CAP与牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联制备免疫抗原与包被抗原,以CAP-BSA免疫新西兰大白兔制备CAP多克隆抗体,以CAP-OVA包被96孔板为固相抗原,与CAP标准品（游离抗原）竞争结合CAP抗体,用稀土离子Eu3+标记的羊抗兔抗体进行示踪,建立起间接竞争CAP-TRFIA检测方法。该方法的灵敏度为0.008ng/ml （8ppt）,测量范围0.008 ng/ml 100ng/ml,不同时间进行的CAP-TRFIA的效应点值ED20、ED50、ED80分别为(25.75±0.442 ng/ml、（0.917±0.081） ng/ml、（0.033±0.0016） ng/ml。批内变异系数6.8%,批间变异系数13.5%。与琥珀酸氯霉素的交叉反应率为19.28%,与甲砜霉素的交叉反应率小于0.1%,与青霉素、诺氟沙星的交叉反应率小于0.01%。牛奶、蜂蜜、虾和鸡肉样品的平均回收率分别为79.7%、112.6%、92.1%和97.1%。考核方法的热稳定性显示有效期应在六个月以上。相比较,酶联免疫吸附检测法（Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA）试剂盒的灵敏度是0.05 ng/ml,TRFIA有明显提高。由于酶受温度、pH等各因素的影响,ELISA试剂盒也存在稳定性差,易产生假阳性等诸多问题。研究表明,CAP-TRFIA是目前报导的CAP检测中最灵敏的方法,具有很好的应用前景。
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摘要ABSTRACT第一章 绪论1.1 氯霉素简介1.1.1 理化性质1.1.2 作用及其机理1.2 残留危害及影响1.3 残留现状1.4 部分国家残留检测要求1.5 氯霉素残留现有的检测方法及局限1.5.1 微生物测定法1.5.2 理化分析法1.5.3 免疫分析技术1.6 时间分辨荧光技术1.6.1 基本原理1.6.2 时间分辨荧光免疫分析方法1.6.3 时间分辨荧光免疫分析仪1.7 本课题的立题目的、意义和研究内容1.7.1 立题目的和意义1.7.2 研究内容第二章 氯霉素抗原和抗体的制备2.1 实验材料2.1.1 主要仪器2.1.2 主要试剂与材料2.2 方法2.2.1 氯霉素抗原的制备2.2.2 氯霉素抗原的鉴定2.2.3 多克隆抗体的制备2.3 结果2.3.1 氯霉素抗原制备与鉴定2.3.2 多克隆抗体的制备与鉴定2.4 讨论2.4.1 氯霉素抗原的制备2.4.2 多克隆抗体的制备2.5 本章小结第三章 间接竞争氯霉素时间分辨荧光免疫分析方法的建立3.1 实验材料3.1.1 主要仪器3.1.2 主要材料与试剂3.2 方法3+-羊抗兔IgG 的制备'>3.2.1 Eu3+-羊抗兔IgG 的制备3.2.2 氯霉素间接竞争时间分辨荧光检测步骤3.2.3 96 孔微孔板的选择3.2.4 最适工作浓度的选择3.2.5 反应时间的确定3.2.6 标准曲线的绘制3.3 结果3+-羊抗兔IgG 的理化鉴定'>3.3.1 Eu3+-羊抗兔IgG 的理化鉴定3.3.2 最适竞争反应条件分析3.3.3 标准曲线的绘制3.4 讨论3.4.1 时间分辨荧光法反应模式的选择3.4.2 最适工作浓度的选择3.4.3 灵敏度的影响因素3.4.4 标准曲线的数学模型和拟和方式3.5 本章小结第四章 氯霉素间接竞争时间分辨荧光免疫分析方法学考核4.1 实验材料4.1.1 主要仪器4.1.2 主要材料与试剂4.2 方法4.2.1 精密度分析4.2.2 标准曲线的稳定性分析4.2.3 灵敏度分析4.2.4 交叉反应率分析4.2.5 破坏性实验4.2.6 回收率分析4.2.7 健全性分析4.3 结果与讨论4.3.1 精密度考核4.3.2 标准曲线稳定性考核4.3.3 灵敏度和工作范围考核4.3.4 方法的特异性考核4.3.5 方法的稳定性考核4.3.6 回收率考核4.3.7 健全性考核4.4 小结第五章 结论与展望5.1 结论5.2 展望参考文献英文缩略词致谢攻读硕士学位期间发表的论文
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