论文摘要
目的:研究胰岛素和PTEN在调控Akt激酶活性中的作用及相互关系;初步探讨PTEN缺失是否影响Cu/Zn SOD表达水平及其意义;探讨PTEN表达水平的差异与胰岛素及Cu/Zn SOD的关系及其在肿瘤发生发展机制中的作用,以更全面的认识抑癌基因PTEN,从而更有效的辅佐临床肿瘤的靶向治疗。方法:胰岛素及NADPH氧化酶抑制剂DPI分别作用于对照小鼠胚胎成纤维细胞PTEN+/+MEFs和PTEN基因敲除的小鼠胚胎成纤维细胞PTEN-/-MEFs,Western Blot检测Akt激酶磷酸化水平的变化; MTT检测细胞生长变化;Western Blot及Northern Blot检测PTEN+/+MEFs及PTEN-/-MEFs内Cu/Zn SOD表达水平的差异;单细胞碱性电泳检测细胞DNA损伤程度;荧光探针标记检测细胞内超氧阴离子水平; MTT检测H2O2对细胞增殖状况的影响。结果:对照PTEN+/+ MEFs细胞内,胰岛素使Akt激酶磷酸化水平上调,DPI处理后,Akt激酶磷酸化回复基础水平,在PTEN缺失的PTEN-/-MEFs细胞内未观察到上述变化;胰岛素作用对照PTEN+/+MEFs细胞后细胞增殖加快,DPI作用后细胞增殖减慢,胰岛素对其增殖的促进作用消失;各种处理因素对PTEN-/-MEFs细胞增殖影响不大;在PTEN缺失细胞系PTEN-/-MEFs中,Cu/Zn SOD在蛋白及mRNA水平上均表达下调,细胞内超氧阴离子水平明显增高,空白组及H2O2处理后DNA损伤程度均较PTEN+/+MEFs细胞重,H2O2对细胞增殖的抑制作用减弱。结论:肽类生长因子胰岛素活化Akt激酶依赖于H2O2的产生和抑癌基因PTEN的存在;PTEN缺失细胞内Cu/Zn SOD表达下调,并由此引起细胞内活性氧持续高水平和氧化损伤的累积以及活性氧对细胞增殖的抑制作用减弱;说明肽类生长因子在PTEN表达阳性的情况下,能通过诱导细胞产生H2O2活化细胞增殖通路PI3K/Akt,加快细胞生长增殖从而促进肿瘤的发生;反之,Cu/Zn SOD在PTEN表达阴性的情况下出现表达下调,从而触发细胞内活性氧持续高水平和氧化损伤的累积以及活性氧对细胞增殖的抑制作用减弱等多种因素能共同促进肿瘤的发生。
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