论文题目: Nudel在内膜系统运输及有丝分裂中的功能
论文类型: 博士论文
论文专业: 细胞生物学
作者: 郁伟
导师: 朱学良
关键词: 内膜系统运输,动粒,纺锤体,有丝分裂
文献来源: 中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）
发表年度: 2005
论文摘要: 驱动蛋白dynein广泛地参与了朝向微管负端的内膜系统运输、有丝分裂,神经细胞迁移等诸多生理过程。Nudel和无脑回蛋白Lis1通过与dynein的直接相互作用而参与了dynein介导的核迁移及神经细胞迁移等过程。在第一部分中,主要研究Nudel在内膜系统运输过程中的作用,我们筛选到特异性地破坏Nudel-Lis1相互作用的突变体Nudel N20和破坏Nudel-dynein相互作用的突变体Nudel C36,以及无结合活性的双突变体Nudel N20/C36。利用这套突变体,通过免疫共沉淀、免疫荧光、分泌实验等实验,我们发现,过表达Nudel突变体N20、C36导致内膜系统弥散分布,内吞过程受阻,蛋白质的分泌过程延滞等病理现象。而野生型Nudel、双突变体N20/C36则基本没有影响。活细胞观测显示,过表达突变体,使得细胞内溶酶体负向运动的速度和持续性大大降低,而对正向运动影响较小。而且通过RNA干扰技术降低Nudel在细胞内的表达,同样会引起高尔基体的弥散分布。以上研究结果均说明,Nudel/dynein/ Lis1作为一个复合物,共同参与细胞内膜系统相关的物质运输。在第二部分中,主要利用RNA干扰技术研究Nudel在M期的功能。在有丝分裂的早中期时,Nudel/Lis1/dynein共定位在动粒(kinetochore,Kts)上。Nudel-RNAi导致有丝分裂异常:多极纺锤体、染色体排布错误,细胞被阻滞在早中期。活细胞观察揭示,Nudel-RNAi导致纺锤体微管(MT)与动粒结合能力减弱。
论文目录:
Abbreviations
第一部分 Nudel 参与dynein 介导的内膜系统运输
摘要
Part Ⅰ Nudel is involved in dynein-mediated membrane traffic
Abstract
1、引言
2、材料与方法
2.1 实验试剂和所用抗体
2.1.1 常用的缓冲液配方
2.1.2 抗体
2.2 实验方法
2.2.1 质粒构建
2.2.2 细胞培养和转染
2.2.3 免疫共沉淀实验
2.2.4 微管解聚实验
2.2.5 免疫荧光技术和荧光显微缩时术(time-lapse microscopy)
2.2.6 细胞囊泡内吞检测
2.2.7 内膜组分纯化
2.2.8 分泌试验
2.2.9 RNA干扰
3、结果
3.1 构建分别与Lis1 和DHC不结合的Nudel突变体
3.2 Nudel参与dynein 介导的内膜系统运输
3.3 内膜囊泡的弥散与微管的相关性
3.4 囊泡微管负向运动的影响
3.5 Nudel突变体抑制蛋白的分泌
3.6 磷酸化调节Nudel与内膜系统的结合
3.7 抑制内源Nudel的表达导致高尔基体的弥散分布
4、讨论
5、结论
参考文献
第二部分 Nudel在有丝分裂中的功能
摘要
Part Ⅱ Nudel fuctions in mitosis
Abstract
1、引言
2、材料与方法
2.1 实验试剂和所用抗体
2.2 实验方法
2.2.1 质粒的构建
2.2.2 细胞培养和转染
2.2.3 免疫荧光技术
2.2.4 激光共聚焦技术
2.2.5 荧光显微缩时术和活细胞荧光观测
2.2.6 RNA干扰
2.2.7 流式细胞术
3、结果
3.1 Nudel在M期的亚细胞定位
3.2 抑制 Nudel的表达导致细胞有丝分裂的阻滞
3.3 Nudel 有助于建立和维持微管和动粒的结合
3.4 Nudel帮助dynein/ Lis1/CLIP-170 定位到动粒
3.5 ZW10 对与Nudel的动粒定位不是必需的
3.6 Nudel参与纺锤体的组装
3.7 Nudel-RNAi影响中心粒锚定和数目,诱导多极纺锤体形成
4、讨论
5、结论
参考文献
专业综述
Publications
致谢
发布时间: 2006-08-29
参考文献
- [1].植物嫁接体的发育：接口融合过程的时期划分、表达谱分析及相关基因的鉴定[D]. 殷昊.兰州大学2012
相关论文
- [1].细胞周期相关基因Cream1和Nudel/NudE的克隆和功能研究[D]. 鄢秀敏.中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）2002
- [2].中心粒蛋白Nudel在中心体上的重要作用及与Gb的关系[D]. 国静.中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）2005
- [3].动粒蛋白mitosin在有丝分裂过程中的功能[D]. 杨振业.中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）2005
- [4].G蛋白偶联受体激酶的新底物Eps15的发现及其生物学功能研究[D]. 马志海.中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）2005
- [5].大鼠心室肌细胞原位Ryanodine受体Ca～（2+）释放的调控[D]. 谢红.中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）2006
- [6].钙离子和蛋白激酶A对背根神经节神经元胞体囊泡转运过程的调控[D]. 熊巍.中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）2006
- [7].水稻响应盐胁迫和低温胁迫的蛋白质组研究[D]. 严顺平.中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）2006
- [8].基于蛋白质序列和生物医学文献的蛋白质功能挖掘[D]. 俞晓晶.中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）2006
- [9].人的类RecD解旋酶Pif1通过抑制端粒酶活性调控端粒延伸[D]. 张登宏.中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）2006
- [10].I.FGF信号通路与P19细胞神经命运决定 II.荧光共振能量转移研究bHLH蛋白的相互作用[D]. 王晨.中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）2006