慢性乙型肝炎患者肝组织内HBV X基因启动子甲基化与临床关系的初步研究

论文摘要

目的检测慢性乙型病毒性肝炎患者肝组织中HBVⅩ基因启动子甲基化程度,并对其甲基化水平与临床关系进行初步探讨。方法收集2009年7月——2010年3月在天津市传染病医院住院的慢性乙型肝炎患者肝组织标本和血清标本各45例,其中HBeAg（+）30例,HBeAg（-）15例,年龄16-65岁。所有病例均符合2005年中华医学会肝病学分会、感染病学分会联合制订的《慢性乙型肝炎防治指南》中的慢性乙型肝炎诊断标准。检测所有患者血清丙氨酸氨基转移酶（alanine transaminase, ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase, AST）及总胆红素（total bilirubin,TBiL）水平。应用电化学发光免疫分析法定量检测血清中乙型肝炎病毒表面抗原（Hepatitis B s antigen, HBsAg）、乙型肝炎病毒e抗原（Hepatitis B e antigen, HBeAg）水平。应用免疫组化方法检测肝组织内HBsAg、乙型肝炎病毒核心抗原（Hepatitis B core antigen, HBcAg）的表达。应用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）方法检测血清HBV DNA水平。利用MethPrimer软件分析预测HBV DNA CpG岛,同时采用高分辨率熔解技术（High Resolution Melting, HRM）检测HBVⅩ基因启动子CpG岛甲基化水平。结果1.45例肝穿标本免疫组化结果：HBsAg（+）:35例,HBsAg（-）:10例；HBcAg（+）:23例,HBcAg（-）:22例。2.45例肝组织标本中,共检测到HBV发生甲基化21例（21/45,46.7%）,其中血清HBeAg（+）:10例（10/21,47.6%）,免疫组化HBsAg（+）:11例（11/21,52.4%）,HBcAg（+）:7例（7/21,33.3%）；HBV未发生甲基化24例（24/45,53.3%）,其中血清HBeAg（+）:20例（20/24,83.3%）,免疫组化HBsAg（+）:24例（24/24,100%）,HBcAg（+）:16例（16/24,66.7%）。分别比较甲基化组和未甲基化组患者血清中HBeAg、肝组织中HBsAg、HBcAg的阳性表达率,差异有统计学意义（P<0.05）。3.甲基化组与未甲基化组慢性乙型肝炎患者,在性别构成、年龄、血清生化学指标ALT、AST、TBiL以及病毒学指标HBV DNA、HBsAg、HBeAg水平等方面差异没有统计学意义（P>0.05）。4.21例发生甲基化的肝组织标本中,血清HBeAg（-）组甲基化水平（61.45±18.27）与HBeAg（+）组（34.10±16.03）比较,差异有统计学意义（t=-3.631,P<0.01）;HBeAg（-）组血清HBV DNA水平（4.32±1.57）与HBeAg（+）组（7.03±1.57）比较,差异有统计学意义（t’=5.100,P<0.01）。5.21例发生甲基化的患者中,血清HBV DNA水平与HBV DNA甲基化水平呈负相关（r=-0.832, P<0.01）, HBeAg水平与HBV DNA甲基化水平呈负相关（rs=-0.657, P<0.05）; HBV DNA甲基化水平与患者年龄呈负相关（rs=-0.706,P<0.05）,而与血清HBsAg、ALT、AST、TBiL水平均无相关性（rs值分别为0.165、0.432、0.24、0.291,P>0.05）。结论1. HBV DNA CpG岛2存在于HBV C基因型（AB540585）第1228-1665位碱基序列中,存在于HBV B基因型（AB540582）第1246-1672位碱基序列中,岛2与HBV增强子I、X基因启动子区域重叠,紧邻增强子II和C基因启动子。2.甲基化组慢性乙型肝炎患者血清HBeAg、肝组织HBsAg和HBcAg的阳性表达率显著低于未甲基化组。发生甲基化的慢性乙型肝炎患者中,HBeAg阳性组血清甲基化水平低于HBeAg阴性组,HBV DNA水平高于HBeAg阴性组。血清HBV DNA、HBeAg水平与肝组织内HBV X基因启动子CpG岛甲基化水平呈负相关。提示HBV X基因启动子CpG岛甲基化可能抑制了血清中HBeAg的表达和肝组织内HBsAg和HBcAg的表达以及HBV DNA的复制。3.甲基化组与未甲基化组慢性乙型肝炎患者在性别、年龄、血清生化学指标ALT、AST、TBiL、血清病毒学指标HBV DNA、HBsAg、HBeAg水平方面比较,差异无统计学意义。但是,发生甲基化的患者中,甲基化水平与患者年龄呈负相关,随着年龄的增长,甲基化水平有降低的趋势。甲基化水平与血清HBsAg、ALT、AST、TBiL水平均无明显相关性。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 资料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述 乙肝病毒感染与DNA甲基化相关研究进展
• 综述参考文献
• 致谢