B7-H4在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义

论文摘要

目的：1.探讨协同刺激分子B7-H4在肾透明细胞癌（clear cell renal cellcarcinoma，ccRCC）组织以及ccRCC患者血液样本中的表达及其临床意义；2.研究肾癌免疫治疗药物IL-2、IFN-α和IFN-γ对人ccRCC细胞株（786-0细胞）增殖活性以及B7-H4分子表达的影响。方法：1.采用免疫组织化学染色方法检测154例ccRCC患者肿瘤组织以及对应的癌旁正常肾脏组织中B7-H4分子的表达情况，探讨ccRCC组织中B7-H4的表达水平及其与ccRCC患者临床病理特征性指标间的关系；2.采用ELISA方法检测43例ccRCC患者血液样本中sB7-H4（soluble B7-H4，可溶性B7-H4）的表达情况，探讨sB7-H4的表达与患者临床病理指标之间的关系；3.用不同浓度的IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激786-0细胞24小时，采用CCK-8方法检测IL-2、IFN-α和IFN-γ对体外培养的ccRCC细胞（786-0细胞）增殖活性的影响；4.用浓度为1000U/ml（786-0细胞的增殖抑制率控制在1%）的IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激786-0细胞24小时，采用RT-PCR方法检测刺激后786-0细胞B7-H4mRNA的表达，探讨IL-2、IFN-α和IFN-γ对786-0细胞B7-H4mRNA表达的影响；5.用浓度为1000U/ml的IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激786-0细胞24小时，采用免疫细胞化学染色法检测刺激后786-0细胞B7-H4膜蛋白的表达，探讨IL-2、IFN-α和IFN-γ对786-0细胞B7-H4分子表达的影响；6.用浓度为1000U/ml的IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激786-0细胞24小时，采用ELISA方法检测刺激后786-0细胞培养液上清中sB7-H4的表达，探讨IL-2、IFN-α和IFN-γ对786-0细胞sB7-H4分子表达的影响；7.用浓度为1000U/ml的IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激786-0细胞24小时，采用流式细胞术检测刺激后786-0细胞膜B7-H4分子的表达，探讨IL-2、IFN-α和IFN-γ对786-0细胞B7-H4分子表达的影响。结果：1. B7-H4分子在ccRCC组织中可见表达，多定位于细胞膜，少部分表达于胞质，在正常肾脏组织中未见表达，ccRCC患者肿瘤组织石蜡切片中B7-H4表达阳性率为59.09%（91/154），而且B7-H4表达与临床病理指标（原发肿瘤分期、区域淋巴结转移、远处转移及临床分期）明显相关（P﹤0.05），而与ccRCC患者一般情况（性别、年龄）无相关；2. ccRCC患者血液中sB7-H4表达的阳性率为53.49%（23/43），而且sB7-H4在患者血液中的表达与ccRCC患者的一般情况（性别、年龄）无明显相关，而与ccRCC患者的临床病理指标（原发肿瘤分期、区域淋巴结转移、远处转移及临床分期）呈现明显相关（P﹤0.05）；3.随着药物浓度的增加，IL-2、IFN-α和IFN-γ对786-0细胞的增殖抑制逐渐增加，1%抑制率的最大药物浓度为1000U/ml；4. RT-PCR检测结果显示：786-0细胞经IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激24小时后，B7-H4mRNA的表达较未刺激组细胞明显增加；5.免疫细胞化学结果显示：786-0细胞经IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激24小时后，细胞B7-H4阳性表达率明显高于未刺激组786-0细胞；6. ELISA法检测显示：786-0细胞经IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激24小时后，细胞上清液中sB7-H4的浓度分别为44.89±0.97ng/ml、46.74±2.25ng/ml和47.31±1.12ng/ml，明显高于未经刺激的786-0细胞组34.42±1.69ng/ml。经单因素方差分析，其差别具有统计学意义（P <0.05），两两比较可知，各实验组间差别具有统计学意义（P <0.05）；7.流式细胞术检测显示：786-0细胞经IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激24小时后，细胞B7-H4阳性表达率分别为（44.89±0.94）%、（46.41±0.55）%和（54.18±1.42）%，明显高于未刺激组786-0细胞（30.45±0.96）%。经单因素方差分析，其的差别具有统计学意义（P <0.05），两两比较可知：对照组与3个药物刺激组之间的差别具有统计学意义（P <0.05），IFN-γ刺激组与其余3组之间的差别具有统计学意义（P <0.05），IL-2刺激组与IFN-α刺激组差距无统计学意义（P=0.235）。结论：1. B7-H4分子在ccRCC患者肿瘤组织和患者血液样本中存在表达，而且其表达与患者的临床病理指标（原发肿瘤分期、区域淋巴结转移、远处转移及临床分期）明显相关，B7-H4分子可以作为ccRCC患者早期诊断、病情评估以及预后判断的分子生物学指标；2. IL-2、IFN-α、IFN-γ可以从mRNA和蛋白质水平上调体外培养的786-0细胞B7-H4表达，其作用以IFN-γ的作用最强，B7-H4诱导的免疫逃逸途径可能是导致IFN-α、IL-2治疗转移性肾癌（metastatic renal cell carcinoma，mRCC）的疗效较低，而IFN-γ无明显疗效的重要原因之一，B7-H4分子可以作为ccRCC患者治疗方案选择的分子生物学指标。

论文目录

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• 致谢
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