海南龙血竭化学成分及其生物活性的研究

论文摘要

血竭为一种传统的名贵中药,是龙血树属等基源植物的木质部在受外力损伤或遭微生物入侵后分泌的红色树脂。现代药理学研究表明：血竭具有抗炎、止痛、抗痢疾、止泻、止血、抗溃疡、抗菌和抗肿瘤等多种药理活性。海南龙血树（Dracaena cambodiana Pierre ex Gagnep.）为龙舌兰科（Agavaceae）龙血树属（Dracaena）植物,也是“血竭”的一种基源植物,是我国特有的珍稀药用植物。但目前对海南龙血竭化学成分和药理的研究尚不多见。因此,开展对海南龙血竭次生代谢产物的分离和鉴定,并筛选出其抗肿瘤和抗菌活性成分的研究,对海南龙血竭的开发和利用具有重要的意义。运用多种色谱技术对海南龙血竭乙醇提取物乙酸乙酯部位进行分离纯化,通过理化性质和波谱学方法（UV, IR, MS, 1D NMR,2D NMR）鉴定了24个单体化合物：cambodianin A （1）, cambodianin B （2）,4,4’-二羟基-2,3’-二甲氧基二氢查耳酮（3）,5,7-二羟基-4’-甲氧基-8-甲基黄烷（4）,（2S）-7,3’-二羟基-4’-甲氧基黄烷（5）,（2R）-7,4’-二羟基-8-甲基黄烷（6）,7,4’-二羟基-8-甲氧基高异黄烷（7）,4,2’,4’-三羟基查耳酮（8）,4,4’-二羟基-2’-甲氧基查耳酮（9）,3,2’,3’,4’-四羟基-4-甲氧基查耳酮（10）,3,2’,4’-三羟基-4-甲氧基查耳酮（11）,4,4’-二羟基-2-甲氧基二氢查耳酮（12）,4,4’-二羟基-2,6-二甲氧基二氢查耳酮（13）,7,4’-二羟基二氢黄酮（14）,7,4’二羟基二氢高异黄酮（15）,丁香脂（16）,松脂醇（17）,2-（4-hydroxyphenyl）-6-（3-methoxy-4-hydroxyphenyl）-3,7-dioxabicyclo [3.3.0] octane （18），表松脂醇（19）,蛇菰宁（20）,1-羟基-6,8-二甲氧基-3-甲基蒽醌（21）,sinapaldehyde （22）,（25R）-螺甾-5-烯-3β-醇（23）和（25R）-螺甾-5-烯-3β,17a-二醇（24）。其中化合物1,2和3为新的黄酮类化合物,其他化合物均首次从海南龙血竭中分离得到。用滤纸片扩散法进行抗菌活性筛选的结果显示,黄酮类化合物1,2,3,5,6,8,9,12和14对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）有抑制活性。化合物4,13和24对金黄色葡萄球菌有抑制活性。化合物21对MRSA有抑制活性。化合物5和6对白色念珠菌（Candidalbicans）有微弱抑制活性。同时MTT法对所得化合物进行体外抗肿瘤活性筛选的结果显示：化合物2,9和13对慢性髓原白血病细胞K562、人肝癌细胞SMMC-7721和胃癌细胞SGC-7901三株肿瘤细胞的生长有较强的抑制活性。化合物6对K562和SGC-7901细胞的生长均有抑制活性。化合物1,4和5对K562细胞的生长具有抑制活性。因此,黄酮类化合物为海南龙血竭的主要活性成分。应用GC-MS技术从海南龙血树茎及其龙血竭脂溶性成分中分别鉴定出21和33种成分。海南龙血树茎脂溶性成分主要有邻苯二甲酸二异辛酯（10.33%）和环木菠萝烷醇（8.51%）；海南龙血竭脂溶性成分主要有薯蓣皂苷元（10.62%）和7-羟基-4′-甲氧基黄烷（9.88%）,其中8个化合物为共有成分。海南龙血树茎及其龙血竭脂溶性成分的组成和含量存在差异,在入药和研究中都应区别对待。以海南龙血树新鲜茎和海南龙血竭中分离到的化合物作为标准品,对海南龙血竭乙酸乙酯提取物进行HPLC分析,建立了海南龙血竭的指纹图谱。并比较了海南龙血竭、海南龙血树和云南血竭的化学成分及其抗菌、抗肿瘤的活性,结果分析表明了这三者在中等极性部位的化学成分很相似,并具有一致的药理活性。对海南龙血树新鲜茎石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水提取物及其乙酸乙酯部分分离纯化的化合物1-9进行了抗氧化活性筛选,并测定了海南龙血树新鲜茎各相中总酚和总黄酮的含量。抗氧化活性结果表明了乙酸乙酯提取物具有最强的DPPH、ABTS和超氧根离子清除率,并且其总酚和总黄酮的含量也最高。海南龙血树的抗氧化活性与这些化合物有关。因此,海南龙血树和化合物1-9具有开发成天然抗氧化剂的潜力。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 1.1 血竭的资源研究概况
• 1.2 血竭中二氢查耳酮类及其多聚体类化学成分的研究
• 1.3 竭的药理活性研究
• 1.3.1 活血化瘀作用
• 1.3.2 止血作用
• 1.3.3 消炎、止痛、抗菌作用
• 1.3.4 降血糖作用
• 1.3.5 对抗雌激素作用
• 1.3.6 体外抗氧化作用
• 1.3.7 抗肿瘤作用
• 1.4 本研究的目的与意义
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 样品来源
• 2.1.2 肿瘤细胞株
• 2.1.3 人体病原菌
• 2.1.4 培养基
• 2.1.5 实验仪器设备
• 2.1.6 试剂及耗材
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 分离纯化
• 2.2.2 抗菌活性测定方法
• 2.2.3 体外抗肿瘤活性测定方法
• 2.2.4 GC-MS方法
• 2.2.5 海南龙血竭指纹图谱建立方法
• 2.2.6 抗氧化活性测定方法
• 3. 结果与分析
• 3.1 海南龙血竭的化学成分及其生物活性
• 3.1.1 海南龙血竭的化学成分
• 3.1.2 抗菌活性
• 3.1.3 体外抗肿瘤活性
• 3.2 海南龙血树茎及其血竭脂溶性成分的GC-MS分析
• 3.2.1 GC-MS结果
• 3.3 海南龙血竭指纹图谱的建立
• 3.3.1 海南龙血竭、海南龙血树和云南血竭化学成分及其抗菌,抗肿瘤活性的比较
• 3.3.2 海南龙血竭的指纹图谱
• 3.4 海南龙血树茎提取物及其酚性化合物的抗氧化活性研究
• 3.4.1 海南龙血树茎粗提物的抗氧化活性分析
• 3.4.2 海南龙血树新鲜茎中化合物的抗氧化活性
• 4 总结与讨论
• 4.1 海南龙血竭的化学成分及其生物活性
• 4.2 海南龙血树茎及其血竭脂溶性成分的GC-MS分析
• 4.3 海南龙血竭指纹图谱的建立
• 4.4 海南龙血树茎提取物及其酚性化合物的抗氧化
• 参考文献
• 缩略语表
• 附录
• 个人简介
• 论文
• 致谢