乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体纯化工艺的比较研究

论文摘要

乙型肝炎是一种世界性的流行疾病,其诊断对于乙肝疾病的预防传播有着积极的意义。采用从小鼠腹水中获得的鼠抗HBsAg抗体,乙型肝炎病毒表面抗原胶体金试剂能够对乙型肝炎病毒表面抗原进行初步的诊断。本文对乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体的几种纯化工艺进行了研究和比较。通过硫酸铵二次沉淀法,辛酸-硫酸铵联合沉淀法,硫酸铵-Prote in G亲和层析法及MEP层析法提纯杂交瘤细胞克隆化后的单克隆抗体。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）,酶联免疫法（ELISA）测定提纯后抗体,得到其得率,纯度和效价。将得到的纯化后的抗体标记到HBsAg试剂条上,用乙肝标本检测抗体的活力和灵敏度。通过以上实验,最终得出了以下结论。用辛酸-硫酸铵联合沉淀法,在辛酸加量3%的情况下,得到的抗体得率为1.8%,纯度为79%,效价是212,得到的结果是四种方法中最佳的,适合在大规模生产上应用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章.文献综述
• 1.1 乙型肝炎简介
• 1.2 乙型肝炎的诊断方法
• 1.2.1 酶联免疫分析法
• 1.2.2 分子生物学检测方法及应用
• 1.3 免疫胶体金技术介绍
• 1.4 单克隆抗体
• 1.4.1 单克隆技术
• 1.4.2 杂交瘤技术原理
• 1.5 抗体的纯化
• 1.5.1 硫酸铵沉淀法
• 1.5.2 聚乙二醇PEG沉淀法
• 1.5.3 辛酸-硫酸铵纯化法
• 1.5.4 离子交换层析法
• 1.5.5 分子筛（凝胶过滤）
• 1.5.6 亲和层析
• 1.5.7 MEP层析
• 1.5.8 高效液相层析（HPLC）
• 1.5.9 免疫磁珠（T-GEL Macro PACTM）
• 第二章.实验材料
• 2.1 材料
• 2.2 主要试剂
• 2.3 试剂配制
• 2.4 仪器设备
• 2.5 实验用单克隆抗体腹水的大量制备
• 第三章 双硫酸铵法
• 3.1 抗体纯化方法
• 3.2 SDS不连续丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定抗体纯度
• 3.3 抗体的活性测定，用ELISA测定效价
• 3.4 胶体金标记快速诊断试剂鉴定抗体的灵敏度和特异性
• 3.5 结果与讨论
• 第四章 辛酸-硫酸铵法
• 4.1 抗体纯化
• 4.2 SDS不连续丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定抗体纯度
• 4.3 抗体的活性测定，用ELISA测定效价
• 4.4 胶体金标记快速诊断试剂鉴定抗体的灵敏度和特异性
• 4.5 结果与讨论
• 第五章 硫酸铵-PROTEIN G亲和层析法
• 5.1 抗体纯化方法
• 5.2 SDS不连续丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定抗体纯度
• 5.3 抗体的活性测定，用ELISA测定效价
• 5.4 胶体金标记快速诊断试剂鉴定抗体的灵敏度和特异性
• 5.5 结果与讨论
• 第六章 MEP层析
• 6.1 抗体纯化方法
• 6.2 不连续丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定抗体纯度
• 6.3 抗体的活性测定，用ELISA测定效价
• 6.4 胶体金标记快速诊断试剂鉴定抗体的灵敏度和特异性
• 6.5 结果与讨论
• 第七章.结论
• 7.1 四种提纯方法的结果比较
• 7.2 结论
• 参考文献
• 致谢
• 发表论文