复方虫草制剂和虫草素对肝癌细胞HepG-2抗肿瘤机制研究

论文摘要

目的研究复方虫草制剂—天力克（TLK）及其单组分虫草素对人肝癌细胞HepG-2抗肿瘤作用的分子机制及其对端粒酶活性影响，探讨复方虫草制剂天力克与单组分虫草素作用机制的异同。方法MTT法检测药物对HepG-2细胞的抑制作用；相差显微镜下观察肝癌细胞形态变化；用透射电镜观察超微结构的变化；Hochest33258荧光染色及吉姆萨染色观察细胞凋亡形态的变化；应用流式细胞仪（FCM）PI染色检测细胞周期变化、凋亡率及bcl-2的变化，AV／PI双染检测早期凋亡及坏死；免疫组化方法测定Survivin蛋白及NF-κBp65的表达；用TRAP-PCR-银染法对肝癌细胞端粒酶活性进行检测。结果MTT法检测示在72小时之内天力克对细胞无明显抑制作用（P＞0.05），虫草素有明显抑制作用，呈剂量依赖性（P＜0.01）。吉姆萨染色及透射电镜、倒置相差显微镜发现天力克作用细胞48小时后，细胞浆出现明显的空泡改变，胞浆内物质降解；虫草素作用24小时后细胞变圆、漂浮，染色质边集和核碎裂；Hoechst33258荧光染色示天力克使细胞核轻微浓缩，而虫草素示细胞核呈深蓝色或成碎片状，并出现典型的凋亡小体；免疫组化示天力克使Survivin蛋白及NF-κB的表达下调（P＜0.0005），而虫草素对Survivin蛋白的表达无影响；FCM检测结果显示天力克作用后，S期细胞比例增高，G1期及G2／M期细胞比例下降（P＜0.0005），并使bcl-2表达下降；虫草素作用后，出现明显的“亚二倍体”凋亡峰，使细胞阻滞于S期。Annexin-V／PI染色后流式细胞仪检测，天力克组出现明显磷脂酰丝氨酸（phosphatdylserine，PS）膜外翻，虫草素作用后显示出早期凋亡图形；TRAP-PCR-银染法示二者都可以使端粒酶活性下调（P＜0.01）。结论：天力克对人肝癌细胞的作用主要是细胞自噬，导致细胞浆空泡变性，胞浆内容物降解，轻度的染色质浓缩；明显改变细胞周期，阻滞细胞于S期，细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻，膜结构发生改变；其抗癌作用机制主要是抑制端粒酶活性、下调Survivin蛋白、NF-κB及bcl-2的表达；虫草素作用于人肝癌细胞后，改变细胞周期，出现典型的凋亡形态改变，并使端粒酶活性下调，通过下调NF-κB的表达而引起细胞凋亡。本实验表明，复方虫草制剂天力克与单组分虫草素的不同药理机制及明确的抗肿瘤作用，显示了复方虫草制剂及虫草素抗肿瘤治疗应用的广阔前景。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略词表
• 前言
• 材料、试剂及仪器
• 分组与方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 问题与展望
• 附图
• 参考文献
• 综述1
• 综述2
• 攻读学位期间发表的论文
• 致谢