乙型肝炎病毒相关性肾炎尿液蛋白质组学的初步分析

论文摘要

目的：研究乙型肝炎病毒相关性肾炎患者的尿液蛋白质谱特点,并与原发性肾小球肾炎伴慢性乙型肝炎患者及健康人尿液蛋白质谱进行比较,筛选出乙型肝炎病毒相关性肾炎尿液中差异表达的蛋白质,探讨质谱技术对该病的临床诊断意义。方法：留取健康人（n=3）、原发性肾小球肾炎伴慢性乙型肝炎（n=3）及乙型肝炎病毒相关性肾炎患者（n=6）的空腹清洁中段晨尿标本,避免细菌生长和蛋白酶解于1小时内放置于-80℃冰箱保存备用。取出12份标本溶解完全后,用直径0.22μm的微孔超滤膜过滤除去较大的杂质,再用-20℃预冷丙酮进行蛋白沉淀,置于-20℃冰箱过夜后,经4℃4000×g离心20分钟,弃上清液,留取含尿蛋白的沉淀物,真空干燥浓缩。浓缩干燥的蛋白沉淀物用PBS充分溶解后应用Bradford法测定蛋白浓度。据测定的标本蛋白浓度称取每例样品含1mg蛋白质的混合固体,充分酶解后调整蛋白浓度为1μg／μl,行HPLC-ESI-MS/MS分析,得到的肽序列结果用MASCOT软件行数据库检索,所用的库为ipi.human,v3.05。将查得的蛋白序列号在Uniprot数据库中进行检索,查询所表达的蛋白质名称、蛋白的作用及细胞学定位等相关信息。结果：健康人3份尿液标本中共鉴定出101种蛋白质,通过手工验证,所有3份标本共同表达了37种蛋白质。原发性肾小球肾炎伴慢性乙型肝炎患者的3份尿液标本共鉴定出73种蛋白质,所有3份标本中共同表达了15种蛋白质。乙型肝炎病毒相关性肾炎患者的6份尿液标本共鉴定出206种蛋白质,所有6份标本共同表达了19种蛋白质。从乙型肝炎病毒相关性肾炎患者共有的19种蛋白质中手工剔除检测出的健康人及原发性肾小球肾炎伴慢性乙型肝炎患者尿液中也存在的蛋白质,还剩余9种蛋白质,它们分别是血浆铜蓝蛋白、α1-抗胰凝乳蛋白酶、Igλ链C区、Igγ2链C区、Igα1链C区、Igα2链C区、维生素D结合蛋白、前列腺素D2合酶、未命名蛋白（C9JAM6）。结论：本实验利用HPLC-ESI-MS/MS技术研究了乙型肝炎病毒相关性肾炎患者的尿液蛋白质谱特点,得到206种蛋白质,并与健康人及原发性肾小球肾炎伴慢性乙型肝炎患者尿液蛋白谱进行比较,尿液中有特异性表达的α1-抗胰凝乳蛋白酶、前列腺素D2合酶、血浆铜蓝蛋白、维生素D结合蛋白有可能成为乙型肝炎病毒相关性肾炎的生物标志物。

论文目录

• 一、摘要
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、正文
• （一） 前言
• （二） 材料和方法
• （三） 结果
• （四） 讨论
• （五） 结论
• （六） 参考文献
• 四、致谢