琼胶寡糖高效毛细管电泳分离分析方法研究

论文摘要

琼胶是一种从江蓠、石花菜等红藻中提取出来的水溶性多糖,主要由琼脂糖和硫琼胶两部分组成。琼脂糖是由交替的3-O-β-D-半乳吡喃糖和4-O-3, 6-内醚-α-L-半乳吡喃糖连接而成的链状中性糖。琼胶寡糖则是琼脂糖降解得到的低聚寡糖,其中β-琼胶酶裂解琼脂糖的?-1,4糖苷键,生成新琼寡糖系列,酸和α-琼胶酶裂解琼脂糖的α-1,3糖苷键生成琼寡糖系列。研究表明新琼寡糖具有耐受消化酶,抑制细菌生长等功能,琼寡糖也有抑制癌细胞及治疗炎症类疾病等多种活性。本文分别利用?-琼胶酶和盐酸降解琼脂糖,得到新琼寡糖和琼寡糖,采用柱前衍生技术,与衍生试剂1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）反应,生成的衍生物具有很强的紫外吸收。利用毛细管区带电泳-紫外检测技术分别对新琼寡糖和琼寡糖进行分离分析研究,优化了衍生条件,并考察了电泳介质浓度、pH值及工作电压对分离的影响。结果表明:新琼寡糖在柱温25℃,电压30 kV,pH 9.0,20 mmol/L的硼砂缓冲溶液中实现了最佳分离;琼寡糖在柱温25℃,电压30 kV, pH 10.0,30 mmol/L的硼砂缓冲溶液中实现了最佳分离。本论文首次利用高效毛细管区带电泳模式进行了琼胶寡糖的分离分析,并建立了较为系统的分离分析方法。该方法也可借鉴于其它低聚寡糖的研究,丰富和发展了寡糖类的分析方法。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 一、琼胶寡糖的生物活性
• 二、糖类的分离分析方法
• 三、本论文研究的目的和意义
• 第一章 琼胶寡糖标准品的制备
• 1 新琼寡糖样品的制备—酶法降解琼脂糖
• 1.1 实验材料
• 1.1.1 原料
• 1.1.2 层析柱及填料
• 1.1.3 化学试剂
• 1.1.4 主要仪器
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 琼脂糖的降解（酶法）
• 1.2.2 新琼寡糖的分离纯化
• 1.2.3 糖含量的测定－硫酸-苯酚法
• 1.2.4 质谱分析（ESI-MS）
• 1.3 结果与讨论
• 1.3.1 琼脂糖的酶解
• 1.3.2 新琼寡糖混合样品的分离
• 1.3.3 新琼寡糖质谱分析（ESI-MS）
• 1.4 小结
• 2 琼寡糖样品的制备—酸法降解琼脂糖
• 2.1 实验方法
• 2.1.1 琼脂糖的降解（酸法）
• 2.1.2 琼寡糖的分离纯化
• 2.1.3 糖的含量测定－硫酸-苯酚法
• 2.1.4 质谱分析（ESI-MS）
• 2.2 结果与讨论
• 2.2.1 琼脂糖的降解
• 2.2.2 琼寡糖混合样品的纯化
• 2.2.3 琼寡糖的质谱分析（ESI-MS）
• 2.3 小结
• 第二章 琼胶寡糖高效毛细管电泳-紫外检测（HPCE-UV）分离分析方法研究
• 1 新琼寡糖高效毛细管电泳-紫外检测分离分析方法研究
• 1.1 实验材料
• 1.1.1 仪器
• 1.1.2 试剂
• 1.2 琼胶寡糖的PMP 衍生
• 1.2.1 衍生试剂的结构
• 1.2.2 PMP 衍生反应机理
• 1.3 新琼寡糖的HPCE-UV 分离分析
• 1.3.1 新琼寡糖的PMP 衍生方法
• 1.3.2 缓冲溶液的配制
• 1.3.3 毛细管柱的维护
• 1.3.4 电泳条件
• 1.3.5 衍生条件的优化
• 1.3.6 电泳条件的优化
• 1.3.6.1 电泳介质pH 值的影响
• 1.3.6.2 缓冲液浓度的影响
• 1.3.6.3 电泳电压的影响
• 1.3.7 标准新琼寡糖的HPCE-UV 电泳图
• 1.3.8 系统适应性试验
• 1.3.9 检测限
• 1.3.10 标准曲线与线性范围
• 1.3.10.1 新琼十糖
• 1.3.10.2 新琼八糖
• 1.3.10.3 新琼六糖
• 1.3.10.4 新琼四糖
• 1.3.11 精密度试验
• 1.3.12 琼脂糖酶解产物的HPCE-UV 分析
• 1.3.13 小结
• 2 琼寡糖高效毛细管电泳-紫外检测分离分析方法研究
• 2.1 琼寡糖的PMP 衍生方法
• 2.2 缓冲溶液的配制
• 2.3 毛细管柱的维护
• 2.4 电泳条件
• 2.5 衍生条件的优化
• 2.6 电泳条件的优化
• 2.6.1 电泳介质pH 值的影响
• 2.6.2 缓冲液浓度的影响
• 2.6.3 电泳电压的影响
• 2.7 琼脂糖酸解产物的HPCE-UV 分析
• 3 小结
• 4 酶法和酸法降解琼脂糖HPCE-UV 方法比较
• 4.1 相同电泳条件下酶法和酸法降解琼脂糖电泳行为的比较
• 结语
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历
• 发表的学术论文