青霉TS67抗菌物质的制剂化研究

论文摘要

本研究拟将本实验室自己分离的生防菌株TS67开发为一种高效、广谱、廉价的生物杀菌剂,为此对青霉TS67的液体发酵工艺、防病促生效果及制剂化工艺进行了初步研究。以玉蜀黍平脐蠕孢菌（Bipolaris maydis）和大豆尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）为指示菌株,验证11株渤海海洋霉菌的抑菌活性。结果表明,菌株TS67对两种病原菌均有很强的抑制作用,100μL发酵上清液对F.oxysporum和B.maydis的抑菌圈直径分别达到了20.3mm和13.6mm。采用正交试验实验方法,研究了青霉TS67菌株的最佳发酵培养基,结果表明蛋白胨、NaCl和葡萄糖各因素对青霉TS67抗生素产量的影响依次减弱。发酵培养基的最佳配方为葡萄糖1%、蛋白胨0.2%、NaCl25g/l、吐温-80 0.1%。单因素实验证实菌株TS67的最佳发酵条件为28℃,170r/min,8%的接种量,接种时间45h,上液量75ml,起始pH值为6,发酵培养96h。同时发现降低稳定期摇床转速能明显增加抗菌物质的产量。在30L发酵罐中培养TS67菌株,在8%接种量,40%上液量,1:0.9通气量,28℃150r/min的条件下发酵培养至pH4.8,所得发酵液对大豆根腐病效价为3029U/mg,发酵液对玉米小斑病效价为2735U/mg。30L发酵罐最佳发酵条件为转速200r/min,通气量1:0.9vvm。采用盆栽试验的方法,通过病情指数和防治效率等指标研究青霉TS67菌株的发酵液、发酵上清液和菌体对大豆根腐病及玉米小斑病的影响。实验结果的SPSS统计分析表明,青霉TS67的所有处理均能显著（P＜0.01）抑制大豆根腐病及玉米小斑病的发生。而且用青霉TS67进行大豆拌种能有效促进大豆幼苗生长。采用60%-80%饱和度硫酸铵对青霉TS67发酵液进行盐析,获得抗菌物质粗制品,并以其为原药,通过表面活性剂的筛选和配伍,确定了3种TS67微乳剂配方。通过正交实验获得TS67最佳产孢培养基的配方为:蔗糖0.9499%,硝酸钠0.1847%,酵母膏0.1%,人工海水60%,琼脂2%,蒸馏水40%,pH6。利用该培养基培养青霉TS67获得分生孢子粉,并与载体油A制成油剂,实验结果表明,当孢子粉含水量≤5%时,以孢子萌发率为指标,该油剂可以在4℃低温黑暗条件下贮存180天。将贮存后的菌株TS67发酵培养,其发酵液对大豆根腐病效价为3146U/mg,对玉米小斑病效价为2645U/mg,保持了新鲜TS67菌株76%的抑菌活力。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1.1 植物病虫害
• 1.2 化学农药防治及其危害
• 1.3 生物防治
• 1.4 生防菌制剂
• 1.5 化学农药制剂
• 1.6 我国生物农药的开发应用现状
• 1.7 本课题的主要研究内容和思路
• 第二章 青霉TS67菌株抑菌效果的验证
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 抗性霉菌的平板初筛
• 2.2.2 抗性霉菌的复筛
• 2.2.3 抑菌活性稳定性实验
• 2.2.4 青霉TS67生长曲线测定
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 抗性霉菌的初筛
• 2.3.2 抗性霉菌的复筛
• 2.3.3 抗菌活性的稳定性实验
• 2.3.4 抑菌活性与菌株TS67生长的关系
• 2.4 讨论
• 第三章 青霉TS67发酵条件优化及扩大培养
• 3.1 实验材料
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 TS67抗菌物质效价测定
• 3.2.2 青霉TS67培养基成分优化
• 3.2.3 菌龄和接种量的优化
• 3.2.4 青霉TS67摇床培养条件优化
• 3.2.5 青霉TS6730L发酵罐发酵条件优化
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 TS67抗菌物质效价测定
• 3.3.2 TS67培养基成分优化
• 3.3.3 接种量和菌龄对TS67发酵液效价的影响
• 3.3.4 TS67摇床培养条件优化
• 3.3.5 TS67 30L发酵罐发酵条件优化
• 3.4 讨论
• 第四章 TS67菌株对大豆根腐病和玉米小斑病的防治效果评价
• 4.1 实验材料
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 大豆盆栽试验
• 4.2.2 玉米盆栽试验
• 4.2.3 显著性检验
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 大豆盆栽实验
• 4.3.2 玉米盆栽实验
• 4.4 讨论
• 第五章 青霉TS67抗菌物质微乳剂的制备
• 5.1 实验材料
• 5.2 实验方法
• 5.2.1 TS67抗菌物质的制备
• 5.2.2 表面活性剂筛选
• 5.3 结果与讨论
• 5.3.1 发酵液抑菌活性检测
• 5.3.2 抗菌物质的硫酸铵盐析
• 5.3.3 表面活性剂筛选
• 5.4 讨论
• 第六章 青霉TS67分生孢子油剂的制备
• 6.1 实验材料
• 6.2 实验方法
• 6.2.1 产孢培养基的正交优化
• 6.2.2 收获孢子粉
• 6.2.3 青霉TS67分生孢子在不同载体油中的耐热性测定
• 6.2.4 青霉TS67分生孢子油剂抑菌活性测定
• 6.3 结果与分析
• 6.3.1 产孢培养基的优化
• 6.3.2 青霉TS67分生孢子在不同载体油中的耐热性测定
• 6.3.3 青霉TS67分生孢子油剂抑菌活性
• 6.4 讨论
• 第七章 结论
• 参考文献
• 科研情况说明
• 致谢