Mcl-1对内质网应激介导的胃腺癌细胞凋亡敏感性的影响

论文摘要

背景及目的:目前晚期胃腺癌的治疗仍未令人满意。一般认为这种情况在很大程度上是由于胃腺癌细胞对临床治疗药物诱导凋亡的抵抗。近期的研究结果已经表明:除了线粒体外,内质网也在调节化疗药物诱发的细胞凋亡中起着重要的作用。这些化疗药物能够引发内质网应激和后续未折叠蛋白反应的激活。尽管未折叠蛋白反应可通过减缓内质网应激状态而保护细胞,过强或持续时间过长的应激反应可引起以凋亡为主的细胞死亡。内质网应激诱导的胃腺癌细胞凋亡的调控机制尚未确定,但已经清楚很多在其它凋亡途径中有重要作用的分子也参与调节内质网应激诱导的细胞凋亡。其中,Bcl-2家族蛋白尤为重要,因为内质网应激诱导的细胞凋亡可以被过表达的Bcl-2或其同源性抗凋亡分子所抑制。据此,本课题组旨在研究Bcl-2家族成员,特别是抗凋亡分子Mcl-1在调控内质网应激诱导的胃腺癌细胞凋亡中的作用,以期寻找克服胃腺癌对化疗诱导凋亡不敏感的潜在靶点。方法:采用诱导内质网应激的天然核苷抗生素衣霉素在不同时间段处理胃腺癌细胞株SGC-7901和BGC-823。通过PI染色法流式细胞术检测凋亡率。Western blot检测caspase-8,-9,-3的活化。Western blot检测Bcl-2家族蛋白,包括Bcl-2,Bcl-XL和Mcl-1的表达。JC-1染色、流式细胞仪检测线粒体膜电位（Δψm）的变化。qRT-PCR检测Mcl-1 mRNA表达。pcDNA3.0/Mcl-1质粒转染及siRNA技术“沉默”Mcl-1基因的表达,Western blot分别检测Mcl-1转染效率。结果:虽然PI染色检测结果,caspase -8,-9,-3的活化以及膜电位的降低都表明衣霉素诱导BGC-823有一定程度的凋亡,而SGC-7901似乎对衣霉素诱导的凋亡稍不敏感。这可能与衣霉素刺激后的Mcl-1分子表达的显著上升有关, Mcl-1分子的siRNA敲除实验促凋亡及Mcl-1过表达的抗凋亡结果都表明Mcl-1在保护细胞抗衣霉素诱导的细胞凋亡中起着重要的作用。相反,衣霉素的处理不会引发Bcl-2和Bcl-XL表达的显著改变。衣霉素作用SGC-7901细胞Mcl-1分子的上调和Mcl-1在mRNA水平的升高有关,表明其中还可能涉及到它的转录机制。结论:体外培养的人胃腺癌细胞对内质网应激诱导的细胞凋亡敏感性的变化和内质网应激状况下Mcl-1的表达水平相关。胃腺癌细胞在内质网应激下Mcl-1表达水平的升高能够阻碍其诱导的细胞凋亡。因此,在胃腺癌的药物治疗能引起内质网应激的情况下,Mcl-1的靶点治疗显得尤为重要。

论文目录

• 中英文缩略词表
• 中文摘要
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• 前言
• 实验流程
• 实验材料
• 实验方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 文献综述