利用基因芯片技术研究针刺治疗小鼠高胆固醇血症的分子机理

论文题目: 利用基因芯片技术研究针刺治疗小鼠高胆固醇血症的分子机理

论文类型: 博士论文

论文专业: 遗传学

作者: 李珉

导师: 张义正

关键词: 小鼠,电针,基因芯片,基因表达谱,高胆固醇血症,丰隆穴,实时定量,病理观察,血液生化分析

文献来源: 四川大学

发表年度: 2005

论文摘要: 采用国际上认可的高胆固醇饲料导致的高胆固醇血症小鼠模型,在生化水平上肯定针刺疗效的同时,利用基因芯片技术高通量、高度并行性、高灵敏度的优势,从整体基因组的角度对针刺降脂的分子机理进行研究。 将C57BL/6J近交系小鼠随机分为正常组、高胆固醇血症组、针刺预防组(简称针预组)。除正常组给予基础饲料以外,其余小鼠给予高胆固醇饲料,针预组小鼠同时进行电针丰隆穴治疗。2周后,高胆固醇血症组小鼠的血浆总胆固醇水平较正常组升高2倍以上,达到6.87±0.36mmol/L,表明高胆固醇血症造模成功。然后将该组的小鼠随机分为模型组、针刺治疗组(简称针治组)、针刺非穴位组(简称针非组)、药物治疗组(简称药物组)。针治组开始电针丰隆穴治疗,针非组电针非穴位,药物组用辛伐他汀治疗,针预组继续电针治疗。各组在进行以上各种处理时继续给予高胆固醇饲料,正常组给予基础饲料,不做处理。16天后,处死小鼠,血浆用于血液生化检测,光镜观察肝脏病理改变,检测肝脂含量,提取肝脏RNA用于基因芯片和实时定量RT-PCR分析。 对6组小鼠的12项血液生化指标分析结果表明,血浆总甘油三酯的比较无统计学意义,各组小鼠除血浆总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇3项指标以外的其余8项指标均无显著差异。模型组小鼠的上述3项指标和2项肝脂指标(肝脏总胆固醇和总甘油三酯)与正常组小鼠相比有显著升

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前言

参考文献

第一章 近交系C57BL/6J小鼠高胆固醇血症动物模型的建立

摘要

1 引言

2 材料和方法

2．1 实验动物

2．2 仪器

2．3 动物分组和处理

2．4 小鼠高胆固醇饲料的配制

2．5 体重检测

2．6 一般观察指标

2．7 血液生化分析

2．8 统计分析

3 结果

3．1 研究总体设计

3．2 小鼠一般指标观察

3．3 实验开始时的血液生化数据

3．4 小鼠体重变化

3．5 高胆固醇血症造模成功的确定

4 讨论

4．1 研究技术路线的设计

4．2 小鼠高胆固醇血症模型的建立

小结

参考文献

第二章 针刺治疗小鼠高胆固醇血症疗效的研究

摘要

1 引言

2 材料和方法

2．1 动物分组与处理

2．2 丰隆穴

2．3 电针处理

2．4 体重检测

2．5 一般指标观察

2．6 实验取样

2．7 生化指标检测仪器

2．8 生化指标的测定

2．9 脏器病理组织学观察

2．10 脏器指数

2．11 统计分析

3 结果

3．1 小鼠一般指标观察

3．2 针刺治疗对血浆胆固醇水平的影响

3．3 电针丰隆穴对肝脂的影响

3．4 体重变化情况

3．5 脏器指数

3．6 小鼠脏器病理组织学观察结果

4 讨论

4．1 电针丰隆穴治疗小鼠高胆固醇血症的效果

4．2 选择电针的依据

4．3 电针参数的选择

4．4 非穴位部位的选择

4．5 检测指标的选择

小结

参考文献

第三章 针刺治疗高胆固醇血症小鼠基因表达谱的研究

摘要

1 引言

2 材料和方法

2．1 肝脏组织的保存

2．2 RNA的提取

2．3 基因芯片检测

2．4 差异表达基因功能的分析

2．5 芯片数据的聚类分析

2．6 各杂交组合之间的比对分析

3 结果

3．1 基因芯片的杂交

3．2 高胆固醇血症小鼠基因的表达

3．3 针刺丰隆穴小鼠的基因表达

3．4 针刺预防高胆固醇血症小鼠的基因表达

3．5 针刺非穴位小鼠的基因表达

3．6 药物治疗高胆固醇血症小鼠的基因表达

3．7 芯片数据聚类结果

3．8 各杂交组合间的比对分析

4 讨论

4．1 基因芯片的选择

4．2 基因芯片杂交结果的可靠性

4．3 基因功能分类的确定

4．4 高胆固醇血症的差异表达基因

4．5 针刺影响的基因功能的分析

4．6 针非组的差异表达基因

4．7 药物组的差异表达基因

4．8 聚类结果分析

4．9 各杂交组合之间的比对分析

小结

参考文献

第四章 针刺治疗小鼠高胆固醇血症的肝脏胆固醇代谢基因表达研究

摘要

1 引言

2 材料和方法

2．1 RNA的提取

2．2 实时定量RT-PCR分析

3 结果

3．1 用于实时定量RT-PCR分析的基因

3．2 校准基因的筛选

3．3 实时定量RT-PCR的电泳结果

4 讨论

4．1 定量PCR方法的选择

4．2 模型组小鼠肝脏的胆固醇代谢的分子机制

4．3 针治组和药物组小鼠肝脏胆固醇代谢的分子机制的比较

4．4 针预组胆固醇代谢的分子机制

4．5 针非组的胆固醇代谢的分子机制

小结

参考文献

综述 胆固醇代谢与内源性阿片肽的分子生物学研究进展

摘要

1 引言

2 胆固醇的代谢

2．1 胆固醇的结构

2．2 胆固醇的生理功能

2．3 胆固醇的内源性合成

2．4 胆固醇的酯化

2．5 胆固醇的动态平衡

3 胆酸的合成

3．1 胆酸合成的经典途径

3．2 胆酸合成的交替途径

4 胆酸的分泌和运输

4．1 胆酸的肠肝循环的基本概念

4．2 肝细胞分泌胆酸的过程

4．3 胆酸的重吸收

4．4 肝细胞内胆酸的运输

4．5 肝细胞的血窦面膜胆酸的流出

4．6 已克隆到的肝细胞膜上的胆酸载体

5 调节胆酸合成和运输的核激素受体

5．1 核激素受体的种类

5．2 核激素受体的结构

5．3 参与调控胆酸合成和运输的转录因子

5．4 核激素受体参与胆酸合成和运输的调控

6 高胆固醇血症的治疗策略

6．1 刺激胆酸合成

6．2 刺激胆酸合成和运输

6．3 抑制胆固醇的吸收

7 针刺治疗高脂血症

7．1 针刺治疗高脂血症

7．2 针刺降脂的临床治疗

8 内源性阿片肽和其受体

8．1 内源性阿片肽的发现及种类

8．2 阿片肽受体

8．3 阿片肽的非阿片作用

展望

参考文献

附表1 高胆固醇血症小鼠差异表达显著的基因

附表2 模型组和针治组杂交中已报道功能的差异表达基因

附表3 模型组和针预组杂交中已报道功能的差异表达基因

附表4 模型组和针非组杂交中已报道功能的差异表达基因

附表5 模型组和药物组杂交中已报道功能的差异表达基因

附表6 各组杂交中所有的差异表达基因

致谢

作者在读期间发表论文情况

获奖情况

声明

发布时间: 2005-10-08

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