半夏的品质及抗肿瘤活性研究

论文题目: 半夏的品质及抗肿瘤活性研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 中医基础理论

作者: 黄必胜

导师: 陈科力

关键词: 半夏,掌叶半夏,水半夏,高效液相色谱,高效毛细管电泳色谱,等电聚焦电泳,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,随机扩增多态技术,质量控制,抗肿瘤,流式细胞术,细胞凋亡

文献来源: 湖北中医学院

发表年度: 2005

论文摘要: 目的:进行半夏的品质和抗肿瘤活性研究。方法:在半夏品质研究方面,采用高效液相色谱(HPLC)测定半夏中琥珀酸的含量,采用高效毛细管电泳(HPCE)测定半夏苯甲酸的含量,采用紫外分光光度法测定蛋白质总含量。采用等电聚焦(IEF)和SDS变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离半夏中蛋白质,采用随机扩增多态DNA技术(RAPD)进行半夏DNA分子鉴别和遗传多样性研究,在半夏抗肿瘤活性方面,采用MTT法测定半夏不同提取物及半夏蛋白对体外培养肿瘤细胞系Bel-7402细胞和HT-29细胞生长的抑制作用,并采用流式细胞术测定其对肿瘤细胞凋亡的影响。结果:建立了用HPLC法进行半夏等药材的琥珀酸含量测定方法,利用该方法测定样品,所选择的包谱条件对琥珀酸的分离较好,其它组分不干扰琥珀酸的测定,色谱峰图形对称,基线平直。稳定性、重现性、精密度均较好。但不同产地的半夏以及同一产地的不同采收期以及同一采收期的大粒与小粒的含量有较大的差异性。不同地区半夏样品的琥珀酸含量差别较大。建立了应用HPCE方法进行半夏药材的苯甲酸含量测定方法。由于苯甲酸紫外吸收强,该方法样品和试课目用量少,分离效率高,稳定性和重现性较高,不同地区半夏苯甲酸含量在0.014～1.568%。紫外吸收法可以测定半夏总蛋白的含量。SDS-PAGE结果显示不同产地半夏具有相似的图谱,半夏与其类似品图谱差异较大,能够起到鉴定作用。并用SDS-PAGE电泳法建立了半夏蛋白特征谱带的分子量测定方法。建立了应用IEF技术分离和鉴别半夏蛋白的方法,多次实验显示:IEF图谱具有较好的稳定性和重现性,为目前半夏蛋白质鉴别较好的方法,它可以区别半夏及其类似品,还可以鉴别某些炮制品,如清半夏、姜半夏等。IEF技术不仅能够较好地分离半夏蛋白质,还可以对各种半夏蛋白质特征谱带的等电点(PI)进行定量分析。运用RAPD技术对半夏遗传多样性进行了研究,分析结果显示,半夏野生转裁培对其遗传多样性影响较小,野生半夏物种水平上的多态性比裁培品种高出2个百分点,钟祥野生半夏多态位点数最高,遗传信息最丰富,质量最优。 Bel-7402细胞和HT-29细胞的MTT和流式细胞测定凋亡结果提示,半夏、掌叶半夏的有机酸部位和乙酸乙酯部位有较好的体外抗肿瘤细胞增殖和诱导肿

论文目录:

缩略词表

中文摘要

ABSTRACT

前言

研究背景

1 半夏的品质研究概况

1．1 中药品质研究的方法学

1．2 半夏研究进展

2 抗肿瘤研究概况

2．1 抗肿瘤药物的体外筛选

2．2 抗肿瘤药物的体内试验

2．3 中药抗肿瘤机理研究

3 本课题研究的思路

3．1 半夏品质研究

3．2 半夏抗肿瘤活性研究

实验研究

1 半夏品质研究

1．1 HPLC法测定半夏玻拍酸的含量

1．2 HPCE法测定半夏苯甲酸的含量

1．3 紫外吸收法测定半夏总蛋白含量

1．4 半夏SDS-PAGE电泳实验研究

1．5 半夏IEF电泳实验研究

1．6 半夏的遗传多样性研究

2 半夏体外抗肿瘤活性研究

2．1 材料、试剂与仪器

2．2 样品制备

2．3 细胞培养

2．4 半夏提取物对体外培养肿瘤细胞形态的影响

2．5 半夏提取物对体外培养肿瘤细胞的抑制作用

2．6 半夏提取物对体外培养肿瘤细胞凋亡的影响

结论

参考文献

博士研究生学习期间发表的论文

致谢

发布时间: 2006-01-09

参考文献

[1].半夏遗传多样性的研究[D]. 郭巧生.南京农业大学1998
[2].半夏属植物凝集素和拟南芥SWI-SNF相关的染色体结合蛋白基因的鉴定及功能研究[D]. 赵欢.四川农业大学2015

半夏的品质及抗肿瘤活性研究

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