论文摘要
将肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株EDL933的基因组序列与大肠杆菌K-12菌株MG1655的的基因组序列比较,发现在EDL933中具有47个长度大于5kb的与细菌毒力、代谢等有关的O岛,O43岛就是其中之一,长度为87kb,其含有尿素酶基因簇、亚碲酸钾抗性基因簇及粘附因子,本室在研究过程中将其命名为UTA岛。本实验研究EDL933中的UTA岛在弗氏枸橼酸杆菌中的分布情况,利用PCR和DNA杂交实验检测UTA岛的尿素酶基因簇（ ureDABCEFG）、亚碲酸钾抗性基因簇（terWZABCDEF）、粘附因子及此岛两侧的连接序列（clpA及下游连接序列）共18个基因;同时根据基因簇的不同型别,选取代表性菌株进行该岛序列测定;采用美国CDC的PulseNet实验方法,利用细菌染色体XbaI酶切脉冲场凝胶电泳（Pulse Field Gel Electrophoresis,PFGE）后,进行实验菌株聚类分析（UPGMA方法）,以了解枸橼酸杆菌的分子流行病学特征,分析UTA岛的不同型别与PFGE带型之间是否具有相关性;此外还进行实验菌株尿素酶及亚碲酸钾抗性的表型实验。本研究发现:在此弗氏枸橼酸杆菌中发现存在ure基因簇及ter基因簇,较完整的结构分别为ureD-ureA-ureB-ureC-ureE-ureF-ureG, terW–terZ–terA– terB-terC-terD-terE-terF;EDL933中iha位于仅临terF的下方,而通过EDL933的iha与本实验的测序菌株枸72进行序列比对后,得知枸72的iha与ure、ter相聚较远,可能不一同够成毒力岛,因而这里不一并列出。在不同株的枸橼酸杆菌中,UTA岛各有特点,共检测到该岛的八种存在形式。其中六株菌（枸66, 67, 71,72,78和95）具有较完整的UTA岛结构;其余菌株中含不完整的UTA岛形式。在此弗氏枸橼酸杆菌的菌株中,无论是完整的该岛还是仅含ure基因簇或ter基因簇的菌株,其左位点均相同,其右位点基本上也均相同（除枸5,可能是由于基因序列变异较大引起的）。其具体分布如下:枸5: ureA -ureB -ureC-ureE-ureF;枸4、48001、48003的表现形式:ureA-ureB- ureC-ureE- ureF,terE;ureG（-）,ter（-）,但其它ure（+）的菌株:ureD-ureA- u -reB-ureC-ureE-ureF;枸70、82、94:ureD - ureA-ureB-ureC- ureE-ureF -ureG;枸74: ureD–ureA–ureB–ureC-ureE-ureF,terB;枸2:ureD- u- reA-ureB-ureC-ureE-ureF , terW-terA -terB-terC-terD-terE-terF;枸3:ureD-ureA-ureB-ureC-ureE-ureF , terW-terZ -terA-terB-terC-terD -terE -terF;枸66、67、71、72、78、95:ureD-ureA -ureB -ureC-ureE-ureF-ureG,terW- terZ-terA - terB-terC-terD-terE-terF。使用Bionumerics数据库软件对PFGE图像进行分析,带型与UTA岛的不同型别之间存在相关性,相同PFGE带型的菌株具有相同的UTA岛结构形式,PFGE的带型越相似,其对应菌株的UTA岛结构就越相似。尿素酶的表达与ureD有密切关系,可能个别氨基酸的变异在尿素酶的表达方面起至关重要的作用;另外ureG对于尿素酶的表达影响不大。亚碲酸钾抗性水平与ter簇有密切关系,并且terABCD一般成簇存在,是决定亚碲酸钾抗性的关键性成分;其次terW对于亚碲酸钾抗性水平的提高有一定的促进作用;再者,有些不含ter基因的菌株也具有较高的抗性,可能与ter簇以外的因素有一定的关系,例:teh、tmp等。