多囊卵巢综合征的病因及其治疗的研究

论文摘要

研究背景多囊卵巢综合征（PCOS）是育龄妇女常见的一种内分泌失调和生殖功能障碍性疾病,临床表现主要为闭经,不孕,多毛和肥胖等,且伴有胰岛素抵抗,高胰岛素血症和高脂血症等代谢异常,目前认为是代谢综合征的一种。其发病原因至今不清,因其发病的家族聚集性,提示该病的发病与遗传因素有关。较多的研究提示,该病可能与多种基因异常有关,已经有发现芳香化酶基因、胰岛素基因、脂联素基因等多种基因可能参与PCOS的发病。多基因可能协同作用,从而引起一系列异常的病理生理改变。促生长激素释放激素受体配体（Ghrelin）是一个于1999年由日本Kojima新发现的由28个氨基酸组成的一种脑-肠肽,是生长激素促分泌剂受体（GHS-R）的内源性配体。除能促进生长素分泌外,还具有广泛其他生物学效应,包括刺激食欲,刺激胃蠕动和胃酸分泌,控制能量平衡以及影响胰腺的内分泌功能及糖代谢。还有研究认为其还能刺激催乳素和促肾上腺皮质激素释放,参与人和大白鼠睾丸组织促性腺激素轴的调控,可能直接抑制中枢LH分泌,减少T分泌。近年来认为Ghrelin在调节能量代谢,影响胰腺的内分泌功能和糖代谢方面所起作用日益重要。因而它与肥胖,2型糖尿病等代谢综合征的发病密切相关。PCOS作为代谢综合征的一种,Ghrelin是否也在其发生发展中起作用?尽管有研究观察PCOS患者血浆Ghrelin水平的变化,并有观察Ghrelin基因多态与肥胖和2型糖尿病有关,但同时综合Ghrelin血清水平及其基因多态在PCOS发病中的作用,目前尚无研究。因此本研究拟通过检测PCOS患者血清Ghrelin水平,同时通过对Ghrelin基因三个SNPrs27647,rs26802,以及rs2075356位点的多态与PCOS不同表型相关性的研究,探讨Ghrelin在PCOS发病及病理生理变化中的作用。目的①通过测定PCOS患者及正常对照血清Ghrelin水平,分析血清Ghrelin水平与内分泌激素,胰岛素及胰岛素抵抗指标、其他各临床指标的相关性,同时探讨PCOS患者测定血清Ghrelin水平的意义。②通过分析Ghrelin基因位点rs27647,rs26802,以及rs2075356在PCOS和正常对照之间基因型和等位基因频率的差异,研究上述三位点的SNP多态与PCOS不同表型的相关性,探讨Ghrelin基因在PCOS发病中的作用。方法依据2003年鹿特丹标准选择PCOS患者48例,同期选择正常对照40例,分别分为肥胖和非肥胖组,胰岛素抵抗组和非胰岛素抵抗组。测定所有研究对象的血清Ghrelin水平和内分泌激素,空腹血糖,胰岛素,血脂等指标,同时测量身高,体重,腰围和臀围,计算体重指数（BMI）,腰臀比例（WHR）,稳态模型胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）,稳态模型胰岛B细胞分泌指数（HOMA-IS）,以及胰岛素敏感指数（ISI）。相同标准选择PCOS患者285例,同期选择正常对照260例,分别测定身高,体重,腰围,臀围,测定内分泌激素,空腹血糖,胰岛素,血脂等指标。提取DNA,根据研究的Ghrelin基因的三个位点,设计相应的聚合酶链反应（PCR）引物。rs27647和rs26802两位点基因型测定采用PCR-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法,最后行电泳分析在凝胶成像系统下显影。rs2075356位点SNP采用等位基因特异性PCR（AS-PCR）方法来测定基因型。结果①血清Ghrelin水平的测定结果:PCOS患者的血清Ghrelin水平明显低于正常对照组,差异有显著性。PCOS肥胖组血清Ghrelin水平明显低于非肥胖组,正常对照肥胖组血清Ghrelin水平明显低于非肥胖组,差异均有显著性。PCOS患者非肥胖组血清Ghrelin水平明显低于对照非肥胖组,差异有显著性;胰岛素抵抗组血清Ghrelin水平明显低于非胰岛素抵抗组,差异具有显著性。血清Ghrelin水平与BMI,WHR,空腹胰岛素水平,HOMA-IR,HOMA-IS呈负相关,与ISI呈正相关。控制BMI影响后血清Ghrelin水平仍与空腹胰岛素水平,HOMA-IR呈负相关,与ISI呈正相关。②Ghrelin基因SNPrs26802,rs27647,rs2075356在PCOS组和正常对照组的基因型分布及等位基因频率均无显著性差异。rs27647和rs2075356两种SNP不同基因型PCOS妇女在临床,内分泌激素,血清Ghrelin水平及代谢指标方面均无差异。rs26802 PCOS患者AA和AC基因型的BMI和WHR高于CC基因型,将AA和AC基因型合并后,BMI和WHR仍高于CC基因型。差异有统计学意义。而其他指标包括内分泌激素及血清胰岛素,血糖,HOMA-IR,血清Ghrelin水平指标方面均无差异。结论①中国汉族PCOS患者存在低Ghrelin水平,血清Ghrelin水平与BMI,WHR,以及胰岛素抵抗呈负相关,但与性激素和血脂无相关性。②Ghrelin基因SNPrs27647,rs2075356与PCOS临床,内分泌,代谢特征无相关性,SNPrs26802与PCOS患者内分泌和胰岛素抵抗无相关性,但与BMI和WHR有相关性。③血清Ghrelin水平与Ghrelin基因SNPrs26802,rs27647,rs2075356多态无相关性。④血清低Ghrelin水平可能与PCOS患者的肥胖的发生有关,进而易发生2型糖尿病,故对血清低Ghrelin水平的PCOS患者应加强调整代谢指标的治疗,以协助PCOS症状的控制,同时预防2型糖尿病等远期并发症的发生。研究背景PCOS是严重影响生育年龄妇女身心健康的疾病,患者主要表现为闭经或月经稀发,无排卵,不孕,多毛等症状,对其治疗目前多是对症治疗,以促排卵治疗为主,目前促排卵一线药物为克罗米芬（CC）,但其耐药性也很高。进一步选用促性腺激素释放激素治疗在增加排卵的同时,也增加了卵巢过渡刺激的发生和治疗费用。故对耐CC的PCOS患者的治疗是目前研究的热点。经阴道B超引导下卵泡穿刺术有研究观察能提高PCOS患者的排卵率。近年来普遍认为PCOS存在明显的胰岛素抵抗,胰岛素增敏剂也在治疗PCOS的临床中得以应用。胰岛素增敏剂联合经阴道B超引导下卵泡穿刺术对耐CC的PCOS患者的治疗尚未有观察。目的观察单独行经阴道卵泡穿刺术和联合二甲双胍治疗对耐CC的PCOS患者排卵率、妊娠率和衡量胰岛素抵抗的胰岛素B细胞分泌指数（HOMA-IS）和胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）的影响。方法耐CC的PCOS患者随机被分为两组,一组仅给与经阴道卵泡穿刺治疗,另一组在给与经阴道卵泡穿刺治疗的同时,给与二甲双胍口服治疗一个月,观察测定两组治疗前和治疗后一个月时的空腹血糖和胰岛素,计算HOMA-IR,HOMA-IS,同时观察每位患者治疗后一个月的排卵情况,统计排卵率,并随访观察治疗后三个月的自然妊娠情况,统计妊娠率。结果穿刺治疗组患者排卵率较治疗前提高,P＜0.01,HOMA-IR和HOMA-IS无明显改变。联合治疗组治疗后排卵率和HOMA-IS均有明显升高,P＜0.01,P＜0.05,HOMA-IR则降低,P＜0.05。两组比较排卵率无差异,但联合治疗组较穿刺治疗组治疗后HOMA-IR降低,HOMA-IS升高。妊娠率单纯穿刺治疗组为24%,联合治疗组为39%,两组相比,P＜0.05。结论单纯卵泡穿刺可提高PCOS患者的排卵率。经阴道卵泡穿刺联合口服二甲双胍在提高排卵率的同时能明显改善耐药PCOS患者的胰岛素抵抗并提高妊娠率。

论文目录

• 中文摘要1
• 英文摘要1
• 中文摘要2
• 英文摘要2
• 符号说明
• 第一章 研究背景
• 1.1 多囊卵巢综合征概念
• 1.2 多囊卵巢综合征发病的相关基因
• 1.2.1 甾体激素合成相关基因
• 1.2.2 糖代谢和能量平衡相关基因
• 1.2.3 促性腺激素作用和调节基因
• 1.3 多囊卵巢综合征病理生理
• 1.3.1 促性腺激素分泌改变
• 1.3.2 胰岛素抵抗
• 1.3.3 高雄激素血症
• 1.4 多囊卵巢综合征的治疗
• 1.4.1 一般治疗
• 1.4.2 抗雄激素治疗
• 1.4.3 纠正代谢异常治疗
• 1.4.4 药物促排卵治疗
• 1.4.5 外科治疗
• 第二章 多囊卵巢综合征患者血清促生长激素释放激素受体配体（Ghrelin）水平测定及其临床意义
• 2.1 前言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 研究对象
• 2.2.2 相关计算公式
• 2.2.3 主要试剂和仪器
• 2.2.4 实验方法
• 2.2.5 统计学分析
• 2.3 结果
• 2.3.1 PCOS组与对照组妇女临床特征及内分泌激素、代谢水平及血清Ghrelin水平的比较
• 2.3.2 根据BMI分组后临床、内分泌、代谢指标及血清Ghrelin水平的比较
• 2.3.3 根据HOMA-IR分组后血清Ghrelin水平的比较
• 2.3.4 血清Ghrelin水平与胰岛素抵抗的相关性分析
• 2.4 讨论
• 2.4.1 Ghrelin概述
• 2.4.2 Ghrelin与肥胖的相关性
• 2.4.3 血清Ghrelin水平与胰岛素抵抗的相关性
• 2.4.4 Ghrelin与性激素的相关性
• 2.4.5 Ghrelin与PCOS的相关性
• 2.5 结论
• 第三章 促生长激素释放激素受体配体基因多态性与多囊卵巢综合征相关性的研究
• 3.1 前言
• 3.2 资料与方法
• 3.2.1 研究对象
• 3.2.2 相关计算公式
• 3.2.3 分子生物学实验
• 3.2.4 统计方法
• 3.3 结果
• 3.3.1 PCOS组与对照组妇女临床特征及内分泌激素、代谢水平及血清Ghrelin水平的比较
• 3.3.2 三种SNP在对照组及PCOS组妇女的分布
• 3.3.3 三种SNP连锁不平衡检验
• 3.3.4 三种SNP在PCOS组妇女肥胖组及非肥胖组中的分布
• 3.3.5 三种SNP在PCOS组妇女IR组及非IR组中的分布
• 3.3.6 三种SNP不同基因型PCOS妇女临床、内分泌、代谢特征及血清Ghrelin水平的比较
• 3.4 讨论
• 3.4.1 Ghrelin基因多态与肥胖的相关性
• 3.4.2 Ghrelin基因多态与胰岛素抵抗的相关性
• 3.4.3 Ghrelin基因多态与血清Ghrelin水平的相关性
• 3.4.4 Ghrelin基因多态与PCOS的相关性
• 3.5 结论
• 第四章 二甲双胍联合经阴道B超卵泡穿刺术对多囊卵巢综合征患者临床和胰岛素抵抗的影响
• 4.1 前言
• 4.2 资料与方法
• 4.2.1 研究对象
• 4.2.2 分组
• 4.2.3 治疗方法和标本收集
• 4.2.4 仪器与操作
• 4.2.5 相关计算公式
• 4.2.6 伦理许可
• 4.2.7 统计学分析
• 4.3 结果
• 4.3.1 两组患者治疗前后排卵率的比较
• 4.3.2 单纯穿刺组患者患者治疗前后胰岛素B细胞分泌指数和胰岛素抵抗指数的变化
• 4.3.3 联合治疗组患者患者治疗前后胰岛素B细胞分泌指数和胰岛素抵抗指数的变化
• 4.3.4 治疗后两组间胰岛素抵抗,排卵率和妊娠率的比较
• 4.4 讨论
• 4.5 结论
• 第五章 结论与展望
• 附录
• 附图
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 学位论文评阅及答辩情况
• 英文论文1
• 英文论文2