芪珠方治疗慢性乙型肝炎的作用机理研究

论文摘要

背景：慢性乙型病毒性肝炎感染乙型肝炎病毒（HBV）后,机体体液及细胞免疫引起的以肝脏损伤为主的全身性疾病。本病流行范围之广、传播途径之复杂、发病率之高、危害性之大,居各种传染病之首,是严重危害人类生命健康的传染病。慢性乙型肝炎在全球范围内分布,全世界有20多亿人被感染,约3.5亿人成为慢性HBV感染者。慢性乙型肝炎患者中约50%-75%有活跃的病毒复制和肝脏炎症改变,其中10%-20%可发展为肝硬化,1%-5%可演变为肝癌。慢性乙型肝炎是WHO公布的人类疾病死亡原因中第9位的疾病。现代医学主要治疗手段包括保肝、降酶、抗病毒、免疫调节等,有效的抗病毒治疗是根治慢性病毒性肝炎的关键。目标是清除或持续抑制HBV,从而阻止或减轻肝脏的炎症、坏死。大量的临床研究证实抗病毒较为理想的药物是干扰素和核苷类似物。但干扰素适应面窄,副作用明显,远期疗效不理想,价格昂贵。核苷类似物易于产生病毒变异等,其临床应用受到限制。大量的临床和实验研究证实,中药复方在保护肝细胞、调节免疫、抗肝纤维化,进而通过综合作用抑制病毒等方面显示了优越性。但在中医药研究中尚存在不少问题,如迄今中医对慢性乙型肝炎的病因、病机、辨证诊断等方面的认识不统一,与目前国际上普遍采用的以肝组织病理学分级分期、临床表现分型的慢性乙型肝炎诊断标准不相适应,难以准确反应慢性乙型肝炎的病变程度,临床缺乏有效、科学、系统的治疗方法,不能满足慢性乙型病毒性肝炎中医临床的要求。目的：通过实验研究,探索芪珠方治疗慢性乙型病毒性肝炎作用机理,明确芪珠方药物组成特点,为临床寻找有效的治疗本病的中医药方法奠定基础。方法：芪珠方是由叶下珠、虎杖、丹参、黄芪,赤芍、白花蛇舌草、土茯苓七味药组成,为保证疗效,最大限度的提出有效成分,本研究选择加热回流法进行提取,通过RP-HPLC对复方中的化学成分进行分析,选择四种不同浓度的乙醇进行提取,分析不同溶剂提取的样品中化学成分的变化。建立肝纤维化模型动物的基础上,中药高、中剂量组分别以16.20g/kg、9.72g/kg（芪珠方生药含量/大鼠体重）灌胃,每日1次,首次造模次日开始给药,连续8周直至动物处死前一天；秋水仙碱组（将秋水仙碱药片磨碎,制成水溶液,每1mL水中含0.1mg秋水仙碱）5.0mL/kg（秋水仙碱含量/大鼠体重）灌胃,每日11次,首次造模次日开始给药,连续8周直至动物处死前一天；模型组用等同于芪珠方大剂量组灌胃体积的生理盐水灌胃,肝组织内TNF-a,IL-4,IL-8,IL-10,TIMP-1,MMP-1,MMP-2,MMP-13表达水平,血清内TIMP-1,MMP-1, MMP-2,MMP-13表达。结果：不同溶剂提取的芪珠方（70%醇提进样为80μL,其余均为10μL）,所得样品出峰数不同,水提及50%、70%、95%提取的复方在25min之前基本上没有出峰,实验过程中,通过加大进样量比较,70%醇提芪珠方出峰最多,且峰形大小和形状较好。肝纤维化模型动物模型组大鼠肝组织中TNF-α,IL-4,IL-8的表达相对空白组明显增加,IL-10的表达则显著减少肝组织中TNF-α,IL-4,IL-8的表达显著减少（P<0.01）,IL-10的表达显著增加（P<0.01）；芪珠方高剂量组TNF-α, IL-4,IL-8的表达低于中剂量组,IL-10的表达高于中剂量组；芪珠方水提组IL-4, IL-8, TNF-α的表达低于同剂量乙醇提取组,IL-10的表达高于同剂量乙醇提取组（P<0.01）。与秋水仙碱组相比,芪珠方治疗组的IL-4的表达均高于秋水仙碱组且有显著差异（P<0.01）；芪珠方治疗组IL-8的表达显著高于秋水仙碱组（P<0.01）；芪珠方治疗组IL-10的表达均低于秋水仙碱组且有显著差异（P<0.01）；芪珠方治疗组TNF-α表达均高于秋水仙碱组（P<0.01）。模型组TIMP-1, MMP-2的表达相对高于正常组,MMP-1, MMP-13的表达相对低于正常组,两组相比差异有显著差异（P<0.01）。所有治疗组TIMP-1,MMP-2的表达低于模型组,MMP-1,MMP-13的表达高于模型组,均有显著差异（P<0.01）。芪珠方高剂量组TIMP-1,MMP-2的表达低于中剂量组,MMP-1,MMP-13的表达高于中剂量组,有明显的剂量依赖性（P<0.01）。芪珠方水提组TIMP-1, MMP-2的表达高于同剂量乙醇提取组（P<0.01）, MMP-1, MMP-13的表达均低于同剂量乙醇提取组（P<0.01）。与秋水仙碱组相比,芪珠方4组治疗组的TIMP-1的表达均高于秋水仙碱组且有显著差异（P<0.01）；大剂量组的MMP-1表达显著高于秋水仙碱组（P<0.01）,中剂量组的表达低于秋水仙碱组,其中醇提中剂量组有差异（P<0.05）,水提中剂量组有显著差异（P<0.01）；4组治疗组MMP-2的表达均低于秋水仙碱组,其中复方大剂量组与醇提组大、中剂量3组有显著差异（P<0.01）,水提中剂量组无统计学意义（P>0.05）；芪珠方大剂量组MMP-13表达高于秋水仙碱组（P<0.01）,中剂量组表达低于秋水仙碱组（P<0.01）。模型组血清TIMP-1, MMP-2的表达相对高于正常组,MMP-1, MMP-13的表达相对低于正常组,两组相比差异有显著差异（P<0.01）。所有治疗组血清TIMP-1,MMP-2的表达低于模型组,MMP-1,MMP-13的表达高于模型组,均有显著差异（P<0.01）。芪珠方高剂量组血清TIMP-1,MMP-2的表达低于中剂量组,MMP-1,MMP-13的表达高于中剂量组,有明显的剂量依赖性（P<0.01）。芪珠方水提组中剂量组血清TIMP-1的表达高于同剂量醇提取中剂量组（P<0.01）,高剂量组间无统计学意义（P>0.05）；水提组MMP-1的表达均低于同剂量醇提组（P<0.01）；水提组MMP-2的表达高于同剂量醇提组（P<0.01）;MMP-13的表达均低于同剂量乙醇提取组（P<0.01）。与秋水仙碱组相比,芪珠方4组治疗组的TIMP-1的表达均高于秋水仙碱组,水提大、中剂量组和醇提中剂量组有显著差异（P<0.01）,醇提大剂量组无统计学意义（P>0.05）；大剂量组的MMP-1表达高于秋水仙碱组（P<0.01）,中剂量组的表达低于秋水仙碱组（P<0.01）；4组治疗组MMP-2的表达均低于秋水仙碱组,其中复方大剂量组与醇提组大、中剂量3组有显著差异（P<0.01）,水提中剂量组无统计学意义（P>0.05）；芪珠方大剂量组MMP-13表达高于秋水仙碱组（P<0.01）,中剂量组表达低于秋水仙碱组（P<0.01）。结论：芪珠方醇提能够治疗慢性乙型病毒性肝炎及肝纤维化,可能是通过调节肝脏及血清的TNF-a,IL-4,IL-8,IL-10,TIMP-1,MMP-1,MMP-2,MMP-13等发挥作用。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 一、慢性乙型病毒性肝炎的中西医认识理论研究
• 1. 乙型病毒性肝炎的中医药研究近况
• 1.1 辨证治疗
• 1.2 自拟方药
• 1.3 复方制剂
• 1.4 单药研究
• 2. 乙型病毒性肝炎的西医药研究近况
• 2.1 肝脏保护药物
• 2.2 抗病毒药物
• 2.3 免疫调节药物
• 2.4 基因治疗
• 2.5 肝移植
• 3. 乙型病毒性肝炎的中医病机析要
• 3.1 湿热疫毒入侵是主要病因
• 3.2 正气不足是发病基础
• 3.3 湿热瘀毒互结,肝脾受损
• 4. 芪珠方治疗慢性乙型肝炎相关研究的背景或立项依据
• 参考文献
• 二、芪珠方治疗慢性乙型肝炎的物质基础研究
• 1. “芪珠方”防治病毒性肝炎物质基础研究进展
• 1.1 “芪珠方”中各味药防治病毒性肝炎的研究进展
• 1.2 “芪珠方”中各味药组分配伍研究进展
• 参考文献
• 2. “芪珠方”不同溶剂部位（组分）的提取和化学成分比较
• 2.1 “芪珠方”不同溶剂部位（组分）的提取
• 2.2 “芪珠方”不同溶剂部位化学成分预试及HPLC图谱分析比较
• 三、芪珠方治疗慢性乙型肝炎的机理研究
• 1. 材料与方法
• 1.1 实验动物、药物
• 1.2 主要设备
• 1.3 实验方法
• 1.4 资料统计
• 2. 结果
• 2.1 芪珠方对大鼠肝组织内TNF-a,IL-4,IL-8,IL-10表达影响
• 2.2 肝脏组织内TIMP-1,MMP-1,MMP-2,MMP-13表达情况
• 2.3 大鼠血清内TIMP-1,MMP-1,MMP-2,MMP-13表达
• 3. 讨论
• 3.1 TIMPs/MMPs与慢性肝炎、肝纤维化
• 3.2 白介素、肿瘤坏死因数与慢性肝炎、肝纤维化
• 结论
• 创新与展望
• 致谢