论文摘要
目的:通过动物模型研究糖尿病大鼠膀胱和腰骶背根神经节（dorsal root ganglia,DRG）中神经生长因子（nerve growth factor,NGF）的表达情况,分析糖尿病膀胱病变（diabetic cystopathy,DC）与膀胱及腰骶DRG中NGF表达的相关性,探讨NGF在DC发生发展中的作用以及DC的发病机制,为应用NGF治疗DC奠定理论基础。方法:成年雌性Sprague-Dawley（SD）大鼠35只,体重200-250g,随机分成2组,正常对照组15只,糖尿病模型组20只。应用链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导形成I型糖尿病大鼠模型,剂量为60mg/kg。设立正常对照组。两组均普通饲料饲喂,自由进食进水。注射STZ 72小时后测尾静脉血葡萄糖浓度（blood glucose,BG）。糖尿病模型组大鼠BG>16.7mmo1/L为模型成功。造模成功8周后进行实验,再次检测两组大鼠尾静脉血葡萄糖浓度,糖尿病模型组大鼠BG≤16.7mmol/L仍被排除。实验前1天测定代谢笼24小时尿量。实验切取完整膀胱和两侧腰6骶1DRG,称量膀胱湿重。苏木素-伊红（Haematoxylin-Iraq red,HE）染色后,光镜下观察糖尿病大鼠膀胱逼尿肌和腰6骶1DRG的形态学变化。据此确认糖尿病模型组DC的形成。采用免疫组织化学方法检测膀胱逼尿肌细胞和腰6骶1DRG神经元中NGF的表达情况。光镜下观察结果,膀胱逼尿肌细胞内或腰6骶1DRG神经元内含有棕黄色颗粒为阳性细胞。每张切片在高倍镜（×400）下选择8-10个视野并记数100个细胞,判断标准:阳性细胞数<10%为阴性表达（-）,≥10%、<30%为弱阳性表达（+）,≥30%、<60%为中度阳性表达（++）,≥60%为强阳性表达（+++）。采用SPSS13.0系统软件对数据处理:结果采用均数±标准差（Mean±Std.）表示,进行t和t’检验及等级资料秩和检验等统计学处理。结果:造模成功8周后,肉眼观察:糖尿病模型组大鼠具有典型的糖尿病状态,皮毛失去光泽,饮水量、食量、尿量增加,排泄稀便等。糖尿病模型组大鼠血糖明显高于正常对照组,为（30.9±3.3mmol/L）vs（4.8±0.3mmol/L）（t’=35.260,P<0.05）;糖尿病模型组大鼠体重较正常对照组增长缓慢,为（248.05±15.52g）v（s322.80±15.92g）（t=13.949,P<0.0005）;代谢笼24小时尿量测定:糖尿病模型组大鼠明显大于正常对照组,为（88.31±7.22ml）vs（20.93±2.90ml）（t’=37.853,P<0.05）;膀胱湿重测定:糖尿病模型组大鼠膀胱湿重明显重于正常对照组,为（171.15±6.08mg）vs（135.53±5.33mg）（t=18.059,P<0.0005）。HE染色后光镜下观察两组大鼠逼尿肌和腰6骶1DRG结构表现。正常对照组:移形上皮细胞排列整齐,固有膜完整,逼尿肌细胞大小形态均一,肌纤维排列有序,肌束之间结构紧密,间隙被结缔组织所充满;神经元细胞排列整齐,细胞间结构紧密。糖尿病模型组:移形上皮细胞排列紊乱,固有膜充血水肿,粘膜下层有明显的嗜酸细胞浸润,逼尿肌肌细胞肥大,形态多样,肌束排列紊乱松散,肌束横断面饱满,体积增加,肌束之间间隙明显增宽,胶原及纤维组织增生,肌束间小血管充血;神经元细胞排列紊乱松散,细胞水肿,细胞间结构松散,间质增生。根据以上结果可以认为糖尿病模型组大鼠DC形成。免疫组化结果显示:正常对照组大鼠膀胱壁NGF主要分布在逼尿肌细胞浆内,在移行上皮和固有膜也有少量表达;而糖尿病模型组大鼠膀胱壁NGF也主要分布在逼尿肌细胞浆内,表达却明显较少。正常对照组大鼠膀胱逼尿肌细胞阳性表达率为86.67%,而糖尿病模型组大鼠膀胱逼尿肌细胞阳性表达率仅为35%。利用等级资料秩和检验进行统计学处理后得出:μ=3.1499,P单侧<0.001,即正常对照组大鼠膀胱逼尿肌细胞内NGF表达水平与糖尿病模型组之间的差异有显著性,也就是说糖尿病模型组大鼠膀胱逼尿肌细胞中NGF的表达水平明显低于正常对照组。同样,正常对照组大鼠腰6骶1DRG神经元中NGF主要分布在细胞浆内;而糖尿病模型组大鼠腰6骶1DRG神经元中NGF也主要分布在细胞浆内,表达却明显较少。正常对照组大鼠腰6骶1DRG神经元细胞阳性表达率为93.33%,而糖尿病模型组大鼠腰6骶1DRG神经元细胞阳性表达率仅为50%。利用等级资料秩和检验进行统计学处理后得出:μ=3.1039,P单侧<0.001,即正常对照组大鼠腰6骶1DRG神经元细胞内NGF表达水平与糖尿病模型组之间的差异有显著性,也就是说糖尿病模型组大鼠腰6骶1DRG神经元细胞内NGF的表达水平明显低于正常对照组。结论:NGF在STZ诱导的I型糖尿病大鼠的膀胱逼尿肌细胞和腰6骶1DRG神经元细胞内表达均明显减少,NGF在DC的发生发展中发挥了重要作用。