大鼠体内苯并（α）芘的生物标志物研究

论文摘要

目的：建立大鼠血液中苯并（Ⅱ）芘的三种代谢产物：1一羟基苯并（Ⅱ）芘（1-OHBaP）、3-羟基苯并（Ⅱ）芘（3一OHBaP）、反式二氢二醇苯并芘一DNA复合物（BPDE—DNA）的高效液相一荧光检测方法，并研究这三种代谢产物在血液中的浓度随着染毒剂量改变的变化规律。通过对比灵敏性、可检测性、稳定性、操作的简便性等指标来衡量其代谢产物作为苯并芘生物标志物的可行程度。方法：取纯度为96％的苯并（Ⅱ）芘溶于玉米油中，配置成高剂量（5-15）mg/ kg、中剂量（0．2-2）mg/ kg、低剂量（0．02-0．2）mg/ kg的灌胃液待用。雄性SD大鼠280只，体重180～220g，随机分为A、B、C、D四个组。A、B、C三个组为暴露组，每组90只，D组10只，为非暴露空白对照组。处理前6h禁食、禁水。A组为高剂量组，90只大鼠随机分为10个小组，用高剂量灌胃液灌胃2mL，染毒剂量分别为5mg/ kg、6 mg/ kg、7 mg/ kg、8 mg/ kg、9 mg/ kg、10 mg/ kg、11 mg/ kg、12 mg/ kg、13 mg/ kg、14 mg/ kg、15 mg/ kg；B组为中剂量灌胃组，灌胃溶液为中浓度灌胃液2mL，染毒剂量分别为0．2 mg/ kg、0．4 mg/ kg、0．6 mg/ kg、0．8 mg/ kg、1．0 mg/ kg、1．2 mg/ kg、1．4 mg/ kg、1．6 mg/ kg、1．8 mg/ kg、2．0 mg/ kg；C组为低剂量染毒组，灌胃液为低浓度灌胃液2mL，染毒剂量分别为0．02 mg/ kg、0．04 mg/ kg、0．06 mg/ kg、0．08 mg/ kg、0．10 mg/ kg、0．12 mg/ kg、0．14 mg/ kg、0．16 mg/ kg、0．18mg/ kg、0．20 mg/ kg；D组为空白对照组，灌胃2mL的空白玉米油。每6h处理一次，一共处理三次。处理期间大鼠禁食禁水。最后一次处理完毕后，2h眼眶取血，一20℃保存。血样分为两个部分，一部分离心取血浆，另一部分留取全血，用以提取全血DNA。取样本血浆lmL，加丙酮2 mL，涡旋5min，离心10min，取上层有机相，置于减压旋转蒸发仪中，氮气吹干。然后加入1 50btL丙酮，50btL荧光衍生剂碘乙烷和0．1g的无水硫酸钠，90℃水浴10min。取20btL，在甲醇/水（14/ 86），PH 7．45；流速：1．0mL/ min，激发波长：280rim，检测波长：330rim的色谱条件下进样，记录色谱图。取样本全血1mL，用全血DNA提取试剂盒处理，提纯的血浆总DNA在0．1 nm01／L Hcl、90℃恒温水浴箱中水解4 h，乙酸乙酯提取酸水解产物——四醇一苯并（a）芘，提取后的乙酸乙酯溶液在减压蒸发仪中用氮气吹干，复溶于20¨ouL丙酮中，取20uL进样，记录色谱图。建立血液中1一OHBaP、3一OHBaP、BPDE—DNA复合物的标准曲线，计算各个染毒组中三种代谢产物的血液浓度，用血液浓度相对染毒浓度做图，探讨其相关关系。结果：本实验方法能够精密、有效地检测三种代谢产物，样品提取回收率良好，精密度较高、稳定性良好。1一OHBaP、3一OHBaP在高中低三个染毒剂量组中均有有效的检出。在中、低剂量染毒组中1一OHBaP、3一OHBaP与染毒剂量呈现明显的正相关关系，在高剂量染毒组中由于1一OHBaP、3一OHBaP均超过了酶饱和浓度，所以没有明显的正相关关系。BPDE—DNA复合物在低剂量组中没有有效检测，在中、高剂量组中达到有效检测，在中剂量组中于染毒剂量呈现明显正相关关系，在高剂量组中由于超过酶饱和浓度，没有发现明显的正相关关系。在三个剂量染毒组中，3一OHBaP的浓度均远高于1一OHBaP和BPDE—DNA复合物的浓度，具有良好的检测性，并且3一OHBaP相对染毒剂量的灵敏性也高于1一OHBaP和BPDE—DNA。结论：本文建立了稳定、高效的高效液相色谱一荧光检测方法，用于苯并（a）芘的生物标志物的检测。在BPDE—DNA、1一OHBaP和3一OHBaP中，灵敏性、可检测性等指标均为3一OHBaP最为优良，可以广泛的进行实际直用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 结果
• 2.1 大鼠染毒模型的建立
• 2.2 方法的专属性
• 2.3 标准曲线和定量限
• 2.4 回收率、精密度和准确度
• 2.5 染毒大鼠血液中的苯并芘代谢物含量
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢