急性心肌梗死患者外周血Exosomes与心肌酶和病变严重程度的相关性研究

论文摘要

目的:本研究通过对急性心肌梗死患者外周血来源的Exosomes的定量、定性分析,探讨急性心肌梗死患者Exosomes与心肌酶学浓度、冠脉病变程度的相关性。进一步了解外周血来源的Exosomes水平在心肌梗死发生发展中的作用及其对急性心肌梗死的预测以及应用价值。方法:1、临床病人的选择:选择2010-9～2011-5因胸痛可疑冠状动脉疾病CAD在我院心内科住院的93例患者进行选择性冠状动脉造影。并将93例患者分为以下四组:N组（24例,正常对照组）,AMI组（23例,急性心肌梗死组）,SA组（24例,稳定性心绞痛组）,UA组（22例,不稳定心绞痛组）。2、外周血Exosomes的提取:于病人行冠状动脉造影术过程中取动脉血40ml,Ficoll离心得血浆,等量PBS稀释,经2000g*30min离心,将上清转入到超离管中12,000×g,离心45min,4?C,之后转移到另外一只超离管中11,000g*2h,4?C,1ml PBS重悬,补足PBS,经0.22μm滤器过滤,11,000g*70min离心后得到Exosomes,50μl-200μl PBS重悬,-80度冰箱保存以备下一步实验需要;3、BCA定量:取Exosomes样本2ul,稀释5倍,按照样本与底物1:20的比例,在nanodrop上进行BCA protein定量;4、流式分析:5ug Exosomes与4μm直径的醛/硫酸乳胶珠在室温结合15 min,加PBS补充至1ml,室温震荡2 h,加入1mol/L甘氨酸30 min阻断反应,4000rpm离心3min,弃上清,PBS/0.5% BSA洗涤3次,500 ul PBS/0.5%BSA重悬,取出10ul结合Exosomes的磁珠分别加入PE-CD11c单克隆抗体、PE-CD81单克隆抗体、APC/cy7-MHCⅡ单克隆抗体、pacific bule-CD86单克隆抗体、PE-CD106单克隆抗体、PE-CD54单克隆抗体、FITC-CD3单克隆抗体及相应的同型对照,避光孵育1 h,PBS洗涤3次,上机检测[1]。5、记录总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、糖化血红蛋白（HbA1c）、CK、CK-MB、CK-MM、空腹血糖（FPG）,同时测量收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、年龄、性别等相关指标,询问吸烟史、高血压病史及糖尿病史。以冠脉病变支数和Gensini积分评价冠脉病变严重程度。6、采用SPSS18.0统计软件进行分析。计量资料以均数±标准差（ x±s）表示。多组之间比较采用方差分析,两组间比较采用t检验;P<0.05为差异具有统计学意义。两样本均数比较采用t检验,多样本均数比较采用方差分析,各率及例数的比较用卡方检验（χ2检验）;Exosomes与CK、Gensini积分等的单因素相关分析应用Spearman秩相关。冠心病危险因素分析采用二分类Logistic回归分析,回归模型以Gensini积分为因变量,年龄、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、白细胞计数、CD11C、CD86、MHC-DR、CK、CK-MM、CK-MB等为自变量。以P<0.05为差异有统计学意义。结果:1、AMI与UA患者Exosomes的定量水平显著高于正常对照组,AMI组Exosomes的表达量显著高于SA组,患者Exosomes的表型分析显示,AMI患者表达的CD11C、CD86、MHC-DR显著高于正常组;2、AMI和UA组Exosomes水平与Gensini积分均高于SA组,提示其与冠脉病变斑块的稳定性有关。3、外周血Exosomes水平与患者血清CK、CK-MB、CK-MM水平、WBC呈正相关。4、外周血Exosomes水平随着Gensini积分增加而增大,呈正相关,可反映Exosomes还与冠状动脉粥样硬化病变的严重程度有关。结论:本研究表明外周血Exosomes与急性心肌梗死的发生及其严重程度相关。外周血Exosomes与血清CK、CK-MB、CK-MM水平、Gensini积分、WBC呈正相关。除了心肌酶水平与冠状动脉造影外,外周血Exosomes可能将会是评估心肌梗死的临床指标之一。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略词表
• 前言
• 一、材料与设备
• （一） 主要仪器设备
• （二） 主要试剂
• 二、实验方法
• （一） 研究对象
• （二） 入选标准
• （三） 临床资料采集
• （四） 冠心病及其相关危险因素的诊断标准
• （五） 冠脉造影方法和结果分析
• （六） 术前采血
• （七） Exosomes的提取与分析
• （八） 统计方法
• 三、实验结果
• （一） 研究对象的一般临床特征
• （二） 各组间Exosomes定量与定性的比较
• （三） 各组间Exosomes的定量和定性与血管病变严重程度的比较-
• （四） Exosomes的表型与临床资料的相关关系
• （五） Exosomes的表型与冠脉发生AMI 密切相关
• 四、讨论
• （一） Exosomes来源的相关讨论
• （二） 树突状细胞在急性心肌梗死中的作用机制
• （三） 树突状细胞来源Exosomes的免疫学应用
• （四） 树突状细胞来源Exosomes在急性心肌梗死发生中的促炎作用和免疫学作用
• （五） 急性心肌梗死的免疫治疗前景
• 参考文献
• 综述外泌体的生物学特点和功能学研究进展
• 参考文献
• 在读期间发表论文和参加科研工作情况说明
• 致谢