活血化淤中药对大鼠肝缺血再灌注损伤中HSP70表达的干预作用研究

论文摘要

目的缺血再灌注损伤（Ischemia/Reperfusion Injury, IRI）是临床上一种常见的病理生理现象,肝脏作为高灌注器官,非常容易发生IRI,其发病机制尚未完全清楚,且无很好的防治手段。肝缺血再灌注损伤时的病理及病理生理变化一直是许多学者研究的重点。本研究通过制作大鼠肝缺血再灌注损伤模型,研究急性肝缺血后不同再灌注时间热休克蛋白70（heat shock protein70,HSP70）的表达规律及其对肝缺血再灌注损伤的保护作用,研究活血化淤中药对大鼠肝缺血再灌注损伤时热休克蛋白70表达的影响,探索药物诱导机体产生热休克蛋白70的可行性。材料与方法1、实验分组:普通级雌性SD大鼠108只,体重200±20g随机分为三组。A组（完全空白组）:36只,按照再灌注0、6、12、24、36、48小时随机分6小组,每组6只,分离肝蒂,但不阻断肝供血。B组（生理盐水组）:36只,建立肝蒂夹闭45分钟的大鼠缺血再灌注模型,按照再灌注0、6、12、24、36、48小时随机分6小组,每组6只。手术前5-10分钟从股静脉注射生理盐水0.5ml∕0.1kg。C组（活血化瘀中药组）:36只,建立肝蒂夹闭45分钟的大鼠缺血再灌注模型,按照再灌注0、6、12、24、36、48小时随机分6小组,每组6只。手术前5-10分钟从股静脉注射活血化瘀中药0.5ml∕0.1kg,活血化瘀中药,其主要成份:红花、赤芍、丹参、当归、川芎。2、动物模型制作:所有手术采取配对方式进行。手术采用4%水合氯醛0.875ml∕0.1kg腹腔注射麻醉,剑突至耻骨联合正中切口。开腹游离肝蒂,充分显露肝蒂,无损伤动脉夹夹闭肝蒂阻断肾血流45min后,松开动脉夹。手术过程中观察肝脏颜色变化,夹闭成功后肝脏颜色变成暗红至苍白色,打开动脉夹则短时间内迅速再灌注充血恢复为鲜红色。3、方法:（1）造模前10分钟及缺血再灌注结束时取静脉血测定血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）活性。（2）根据不同再灌注时间点结束时取部分肝放于液氮罐中保存,利用免疫印迹方法定量检测各实验组不同再灌注时间点HSP70的表达;（3）另取部分肝立即置于10%福尔马林溶液固定24小时,常规石蜡包埋,存于-4℃冰箱HE染色制片,同时取肝活组织制作电镜标本。结果1、血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）活性变化:A组与B组再灌注6小时以上组肝功能改变差异显著（p<0.05）,表明肝缺血再灌注损伤后出现急性肝功能不全;A组与C组差异不显著（p>0.05）,表明肝缺血再灌注损伤后中药干预组肝功能破坏不显著;B组与C组再灌注6小时以上组差异显著（p<0.05）,表明活血化瘀中药有对抗肝缺血再灌注损伤并保护肝功能的作用。2、病理切片HE染色光镜及电镜照片:B组与A组对比表明,肝缺血再灌注损伤后肝脏病理改变明显;C组与B组及A组对比肝缺血再灌注损伤后肝脏病理改变减轻,表明活血化瘀中药减轻了肝脏病理损害。3、Western blot结果:与A组对比B、C组HSP70的表达随再灌注时间延长而不断增加,B组HSP70在再灌注24h表达达到高峰,C组HSP70表达在再灌注12h较B组提前达到高峰,表明活血化瘀中药诱导HSP70表达提前达高峰发挥保护作用。结论1、正常肝脏组织少量表达HSP70。2、缺血再灌注损伤后肝脏组织HSP70的表达显著增加, Western blot结果显示B组和C组HSP70的表达分别在缺血再灌注后24小时和12小时显著增加。3、活血化瘀中药干预组HSP70表达提前显著升高,提示可能引发了内源性保护机制,为临床上寻找肝缺血再灌注损伤的药物治疗提供重要的理论依据。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料与方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 附图
• （九） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢