鸡胸腺发育形态学研究

论文摘要

胸腺（thymus）为中枢淋巴器官,它是T细胞发育、分化和成熟的场所。骨髓中产生的T祖细胞在多种趋化因子的作用下进入胸腺,在胸腺微环境内发育分化为成熟的T细胞,进入外周血和淋巴器官中,成为机体健康的卫士。但动物胸腺存在增龄性萎缩（退化）,功能减退现象,机体也随之衰老,疾病丛生。本课题通过研究不同日龄鸡胸腺形态结构变化、神经-内分泌-免疫网络调节因子分布变化规律来探讨胸腺发育和萎缩的机理,主要研究内容和结果如下：1鸡胸腺组织学结构的增龄性变化规律为研究不同日龄鸡胸腺结构增龄性特点,了解鸡胸腺萎缩的可能机制,本课题采用HE和PAS染色技术对不同日龄鸡胸腺切片进行染色,并测定其形态学指标。结果显示,胸腺表层的被膜伸入到实质内,将其分成许多不完整的胸腺小叶。实质由皮质和髓质构成,表层皮质着色较深,内侧髓质染色较浅。皮质主要由淋巴细胞和少量上皮细胞构成,髓质主要由上皮细胞和少量淋巴细胞构成,内含典型的胸腺小体结构。随着日龄增加,皮质变薄,皮、髓质面积比例逐渐减小；髓质部血管丰度逐渐递增；典型胸腺小体能够分泌多糖的活性,且总数有缓慢递增趋势,21日龄达峰值,35日龄后缓慢递减；其中钙化小体不具有分泌多糖的活性,随增龄其数量有显著递增。这一研究表明,随着胸腺的发育和衰老,骨髓中的始祖T细胞迁移至胸腺的能力以及分化的能力均下降,同时伴有胸腺细胞数量及其生活动区域减少,即皮质区域进行性缩小,胸腺萎缩；由于衰老引起的T淋巴细胞减少不能满足机体的需求,从而可能导致血管代偿性的增多,也有可能是中鸡胸腺产生了大量死亡胸腺细胞胸腺血管要靠自身数量的增多才足以运输和清理增龄过程产生的大量死亡细胞,或者,胸腺萎缩使得单位范围内毛细血管丰度增加；具有多糖分泌活性的胸腺小体功能下降,可能从另一个侧面为胸腺小体与胸腺的衰老有关提供了证据。2神经递质5-HT在鸡胸腺内的增龄性变化规律为研究相关神经递质（5-HT）在鸡胸腺内的分布及表达变化规律,本课题采用免疫组织化学SABC法对不同日龄阶段的AA肉鸡胸腺进行5-HT阳性细胞形态学观察。结果显示,各日龄鸡胸腺都含有5-HT阳性物质,主要分布于胸腺髓质以及皮、髓质交界区。5-HT阳性细胞大多围绕血管壁或靠近血管呈簇分布,也有少量阳性细胞的散在分布。阳性细胞具有形态多样性,大多呈圆形或卵圆形,还存在-些明显的丝状或束状形态。另外,典型胸腺小体呈5-HT阳性反应,而在钙化胸腺小体中5-HT则紧紧围绕其外周分布。5-HT阳性产物在鸡胸腺中的表达强度随日龄增长有递增趋势。这一研究表明,5-HT阳性细胞在鸡胸腺髓质内的优势分布提示5-HT可能参与胸腺T细胞的分化成熟,调节胸腺供血量；随日龄增长,5-HT表达强度呈递增趋势,而胸腺的发育在此过程中经历了增长和萎缩,提示胸腺的发育情况与5-HT的表达强弱有关,低表达能促进胸腺生长,而高表达则抑制胸腺生长并最终导致胸腺萎缩,即5-HT对胸腺的发育有免疫促进和抑制双重作用。3 TLR4在鸡胸腺内的增龄性变化规律为研究相关免疫因子TLR4在不同日龄阶段鸡胸腺内的分布及表达变化,探讨免疫因子对胸腺影响的可能性机制,本课题采用免疫组织化学SABC法对不同日龄阶段的AA肉鸡胸腺进行TLR4阳性细胞形态学观察。结果显示,TLR4的阳性表达产物见于鸡胸腺发育的早期阶段,且阳性较强,120日龄鸡胸腺中表达非常微弱。TLR4阳性产物主要分布于胸腺皮质、髓质交界区,靠近髓质的一侧,形成一个典型的环状。在髓质中,这些阳性细胞在胸腺小体和血管近附近呈簇分布,也有少量阳性细胞的散在分布。TLR4阳性细胞具有形态多样性。TLR4在鸡胸腺中免疫阳性表达强度随日龄增加有递增趋势,35日龄达到峰值,随后逐渐递减。这一研究表明,TLR4在胸腺中的分布表达具有一定规律性,提示TLR4可能参与并调节T细胞的发育、分化和成熟过程；TLR4表达强度与胸腺发育具有时间相关性,提示TLR4可能由于表达量的降低导致胸腺退化和免疫衰老。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略语表
• 1 前言
• 1.1 立题背景
• 1.2 文献综述
• 1.2.1 5-HT的作用及其与胸腺发育的关系
• 1.2.1.1 5-HT的来源及分布
• 1.2.2 TLR4与胸腺发育的关系
• 1.2.2.1 Toll受体的发现、分类和分布
• 1.2.2.2 TLR与天然免疫
• 1.2.2.3 Toll样受体的功能与胸腺的关系
• 1.2.3 胸腺萎缩机理的相关研究
• 1.2.3.1 胸腺萎缩与免疫衰老
• 1.2.3.2 胸腺萎缩的早期理论学说
• 1.2.3.3 胸腺萎缩的调控机制
• 1.2.4 研究目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 试验动物
• 2.1.2 主要仪器设备
• 2.1.3 主要试剂
• 2.1.4 主要溶液的配制
• 2.1.4.1 4%多聚甲醛固定液配制
• 2.1.4.2 Harris苏木精染液配制（杜卓民,1998）
• 2.1.4.3 1%伊红染液配制
• 2.1.4.4 PAS试剂配制
• 2O₂配制'>2.1.4.5 3%H₂O₂配制
• 2.1.4.6 0.01 M枸橼酸盐缓冲液
• 2.1.4.7 浸泡载玻片盖玻片酸液
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 样品采集
• 2.2.2 石蜡切片制作
• 2.2.3 HE染色
• 2.2.4 PAS染色
• 2.2.5 免疫组织化学SABC法染色
• 2.2.5.1 染色步骤
• 2.2.5.2 结果判定
• 2.2.6 切片定性及定量分析
• 2.2.6.1 胸腺皮髓质面积比例、皮质胸腺细胞数测定
• 2.2.6.2 记数用目镜测微尺,记数落在一定测试范围的胸腺小体个数
• 2.2.6.3 5-HT和TLR4免疫组织化学阳性产物的积分光度（IOD）值的测定
• 2.2.7 数据统计分析
• 3 结果
• 3.1 不同日龄鸡胸腺组织结构变化规律
• 3.1.1 鸡胸腺组织学结构
• 3.1.2 不同日龄鸡胸腺组织结构变化规律
• 3.1.2.1 鸡胸腺皮、髓质面积比随日龄变化规律
• 3.1.2.2 鸡胸腺血管丰度随日龄变化规律
• 3.1.2.3 鸡胸腺小体数量变化规律
• 3.2 神经递质5-HT在鸡胸腺内的增龄性变化规律
• 3.2.1 5-HT在鸡胸腺中的分布
• 3.2.2 5-HT在鸡胸腺内的增龄性变化规律
• 3.3 TLR4在鸡胸腺内的增龄性变化规律
• 3.3.1 TLR4在鸡胸腺中的分布
• 3.3.2 鸡胸腺中TLR4阳性细胞形态
• 3.3.3 鸡胸腺中TLR4阳性表达随年龄变化规律
• 4 讨论
• 4.1 增龄对鸡胸腺形态结构的影响
• 4.1.1 鸡胸腺皮、髓质面积比随日龄变化规律
• 4.1.2 鸡胸腺血管丰度随日龄变化规律
• 4.1.3 鸡胸腺小体随日龄变化规律
• 4.2 不同日龄鸡胸腺内5-HT
• 4.2.1 5-HT在鸡胸腺内的分布特点
• 4.2.2 鸡胸腺中5-HT阳性细胞形态特点
• 4.2.3 鸡胸腺小体中5-HT的分布特点
• 4.2.4 鸡胸腺中5-HT在血管周围的分布特点
• 4.2.5 5-HT在鸡胸腺内的增龄性变化规律
• 4.3 不同日龄鸡胸腺内TLR4
• 4.3.1 TLR4在鸡胸腺内的分布特点
• 4.3.2 TLR4在鸡胸腺内的增龄性变化规律
• 结论
• 进一步研究方向
• 参考文献
• 致谢
• 附录1 个人简历
• 附录2 发表论文情况
• 附录3 学术交流及获奖情况