桃拉综合征病毒分子检测、全基因组特性分析及CP2结合蛋白的噬菌体肽库筛选

桃拉综合征病毒分子检测、全基因组特性分析及CP2结合蛋白的噬菌体肽库筛选

论文摘要

桃拉综合征病毒的分子流行病学桃拉综合征病毒(Taura syndrome virus,TSV)是引起全球对虾尤其是凡纳滨对虾(Penaeus vannami)急性传染病的病原之一,近年来经常在我国引发虾病。但到目前为止,中国很少做过TSV的流行病学调查。采集漳州、厦门、深圳、阳江、宁波、广州、海口7个地区31个养殖场的对虾共310尾,以RT-PCR技术检测TSV。结果310尾对虾中有166尾感染TSV,阳性率达到53.5%。各地凡纳滨对虾感染TSV的阳性率分别为100%(漳州)、97%(厦门)、33.3%(深圳)、40.7%(阳江)、50%(宁波)、40%(广州),表明凡纳滨对虾在各地均有一定比例感染TSV。用Southern blot杂交和测序验证RT-PCR反应的特异性。克隆测序的结果通过Blast与Genbank中的序列进行比对,各地TSV分离株231bp核苷酸同源性为98.7~100%,将这些序列绘制成基因树,与已发表的序列比较,显示:美国分离株HI94、墨西哥分离株MX1、台湾分离株TW1及巴西分离株BLZ01分布在一个分支上:越南株(YN1)与本次测序的21个中国大陆株分布于另一分支上。这21个中国株聚集成群,与越南株形成并列的两个分支。而来自广州的5个分离株(GUZ2、GUZ16、GUZ25、GUZ29、GUZ31)又聚集成群与深圳的2个分离株(SZB4、SZB6)构成中国株的一个子分支。 桃拉综合征病毒中国株的全基因测序及分析设计8对引物分片段扩增桃拉综合征病毒中国分离株ZHZC3全基因组,病毒两末端序列采用末端快速扩增方法(RACE)获取。扩增产物克隆到DMD18-T载体并测序,用DNAstar软件拼接全序列及同源性比较。结果显示ZHZC3全序列除去3’ poly(A)尾,由10202个碱基组成,有两个开放阅读框,分别编码2107和1011个氨基酸的聚蛋白。与美国参考株HI94相比,在编码区没有核苷酸的缺失和插入,但在5’ UTR缺失3个A,两者整体核酸同源性达97.9%。ORF1中ZHZC3与HI94及巴西株(BLZ01)的核酸同源性分别为97.6%、97.7%,在ORF2中ZHZC3与HI94、BLZ01的核酸同源性则分别为98.3、97%。与国外株ORF2的部分序列比较发现:ZHZC3和中国台湾株均与美国株HI94同源性最高。克隆分析6株TSV中国大陆株主要结构蛋白CP2基因,发现其编码的氨基酸存在三个高变区,中国大陆株更有其独特的氨基酸变异模式,312(S),449(A),451 Q)和468(H)。表明该病毒的整体变异性不高,但中国的流行株已形成其自己的遗传演变特征。在此基础上,利

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 文献综述
  • 第一章 桃拉综合征病毒研究进展
  • 第二章 噬菌体展示技术的研究进展
  • 研究内容
  • 第一章 RT-PCR结合地高辛标记探针检测我国东南沿海对虾的桃拉综合征病毒及序列分析
  • 1 材料与方法
  • 2 结果
  • 3 讨论
  • 参考文献
  • 英文摘要
  • 第二章 桃拉综合征病毒中国株ZHZC3全基因测序及分子结构预测
  • 1 材料与方法
  • 2 结果
  • 3 讨论
  • 参考文献
  • 英文摘要
  • 第三章 桃拉综合征病毒CP2蛋白高变区的表达、纯化及多价抗血清制备
  • 1 材料与方法
  • 2 结果
  • 3 讨论
  • 参考文献
  • 英文摘要
  • 第四章 用噬菌体随机肽库筛选TSV CP2高变区蛋白的结合蛋白
  • 1 材料与方法
  • 2 结果
  • 3 讨论
  • 参考文献
  • 英文摘要
  • 全文总结
  • 发表论文
  • 致谢
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