NSA2在激光诱导的小鼠脉络膜新生血管模型中表达的时相性和定位研究

论文摘要

目的：（1）建立小鼠脉络膜新生血管（choroidal neovascularization，CNV）动物模型；（2）采用RT-PCR、Western blot和免疫荧光染色技术对NSA2（Nop seven-associated2）在C57BL/6J小鼠CNV动物模型眼组织中的表达情况进行研究，以期为探讨湿性AMD的发病机制提供新的实验依据和理论依据。方法：（1）采用532nm氩激光诱导C57BL/6J小鼠CNV动物模型；（2）取光凝后14d组小鼠眼做脉络膜铺片，用CD31抗体标记血管内皮细胞的方法对CNV模型进行鉴定；（3）采用RT-PCR和Westernblotting方法检测正常对照组和光凝后1d、3d、5d、7d和14d组小鼠CNV中NSA2mRNA和蛋白的表达变化情况进行研究，得出光凝后不同时间点NSA2在CNV模型鼠眼组织中表达的时间变化规律；（4）取光凝后7d组小鼠眼球做冰冻切片，用免疫荧光染色方法对NSA2蛋白在CNV模型鼠眼组织中的表达进行定位研究。结果：（1）在本课题中，我们用532nm氩激光成功稳定的诱导出了C57BL/6J小鼠CNV动物模型，能满足该课题中所有实验的需要。（2）PCR结果显示NSA2mRNA在正常成年C57BL/6J小鼠视网膜-脉络膜-巩膜复合物中弱表达。视网膜光凝后，NSA2mRNA在CNV模型眼的视网膜-脉络膜-巩膜复合物中的表达有明显的时间变化规律，光凝后1d NSA2的表达开始上调，13d逐渐增强，3d达高峰，之后其表达逐渐减弱。其中，光凝后1d、3d、5d、7d组NSA2mRNA的表达明显高于正常对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；光凝后14d组NSA2mRNA的表达与正常对照组相比无统计学意义（P＞0.05）；光凝后3d组NSA2mRNA的表达量明显高于其余各组，差别有统计学意义（P＜0.05）。（3）Western blot结果显示，NSA2蛋白在正常成年C57BL/6J小鼠视网膜-脉络膜-巩膜复合物中呈弱表达。光凝后1dNSA2蛋白的表达开始上调，3d达高峰，之后逐渐下降，14d组NSA2蛋白的表达与正常组相比仍有明显差异（P＜0.05）；光凝后3d组和5d组NSA2蛋白的表达量明显高于其余各组，差异明显（P＜0.05），但3d组和5d组组间比较，未见明显差异（P＞0.05）。（4）免疫荧光染色结果显示NSA2蛋白在正常小鼠视网膜外丛状层有较强表达；在光凝后7d组CNV模型鼠眼组织中，除了在视网膜外丛状层中NSA2蛋白呈高表达外，在组织增生活跃的CNV形成区域也可检测到较强的NSA2蛋白表达，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：NSA2在CNV形成早期表达上调，具有明显的时间变化规律，且在CNV区域有较强的表达，因此我们推断NSA2可能在CNV形成这一病理过程中起着重要作用。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 CNV 模型检测结果
• 2.2 RT-PCR 结果
• 2.3 Western Blot 结果
• 2.4 免疫荧光染色结果
• 3 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 文献综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的文章