论文题目: 真菌诱导子对铁皮石斛原球茎诱导作用的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 生药学
作者: 侯丕勇
导师: 郭顺星
关键词: 铁皮石斛,原球茎,真菌诱导子,药理作用,石斛总生物碱,反相高效液相,碱化作用,细胞化学定位,酸性磷酸酶,碱性磷酸酶,超微结构,苯丙氨酸解胺酶基因
文献来源: 中国协和医科大学
发表年度: 2005
论文摘要: 由于铁皮石斛繁殖能力低、生长缓慢、成熟周期长，加上近年来的过分采挖，野生资源已濒临枯竭。因此，用铁皮石斛组培苗或原球茎代替野生药材的研究在我国逐渐引起关注。根据兰科植物与真菌共生形成菌根的特点，本文对真菌诱导子对铁皮石斛原球茎生长发育及其质量的影响进行了较系统研究。 选用24种真菌制成诱导子与液体培养的铁皮石斛原球茎共培养后发现：10号真菌诱导子对原球茎生长量有提高作用，而其它真菌诱导子无影响；多种诱导子分别处理的原球茎的提取物对T淋巴细胞增殖有促进作用，其中24号真菌诱导子处理的原球茎的提取物既可促进淋巴细胞的增殖、也可抑制肿瘤细胞生长。通过对24号真菌形态学特性的研究和ITS序列的分析，初步确定24号真菌为小菇属真菌。 培养基添加24号真菌诱导子培养106小时，可以使液体培养的铁皮石斛原球茎总生物碱含量比对照提高58.2％。薄层层析和高效液相色谱分析结果表明：24号真菌诱导子处理的原球茎比处理前有7种新成分出现；其中有3种成分为野生铁皮石斛所特有。 采用液体-固体双重循环培养方法实现原球茎的快速繁殖，并研究各个环节中原球茎生长和发育的因素。研究结果表明选择1／2MS固体培养基、20％马铃薯提取液、3％蔗糖、pH5.8的培养条件对原球茎的生长较为有利；其中培养基中添加马铃薯提取液是原球茎快速生长和BAP促进其分化苗的必要条件。pH6.0、添加灭活真菌的培养基上的原球茎生长受到抑制；激素NAA可使原球茎生长量比对照提高16％。铁皮石斛原球茎在液体培养体系(67-V)生长迅速、品质良好；由此获得的原球茎向固体培养转移的最优培养基为全1／2MS固体培养基。 循环培养过程中筛选出了性状稳定的G、B、E、Hp6原球茎株系；其中株系B和Hp6的总生物碱的含量比普通原球茎(CK)高20％以上。而株系G的原球茎阶段稳定、对真菌诱导子敏感。在此基础上，对原球茎株系G进行单一胚系筛选，选出的铁皮石斛原球茎苗不发育株系(SUDP)的形态发生和发育速度一致的，性状稳定，适合作诱导作用的实验。另外，研究还发现灭活的真菌、偏碱性的培养基、葡萄糖作碳源可使原球茎分化苗的能力减弱；而激素BAP则与之相反。 诱导子对原球茎质量作用较好的参数为：pH5.6、基本培养基中加入15％的24号真菌菌丝诱导子、诱导培养120小时；在该条件下SUDP石斛总生物碱含量是对照的1.725倍。 研究了24号真菌诱导子作用下SUDP原球茎培养基碱化作用的特点和同条件下酸碱磷酸酶的活动情况。在24号真菌诱导子作用下，原球茎培养基碱化作用是一个多步
论文目录:
中文摘要
英文摘要
前言
第一章 论文综述
第一节 铁皮石斛的药学研究概况
第二节 真菌对植物的诱导作用
第二章 铁皮石斛原球茎培养策略的研究
第一节 影响原球茎在固体培养基上生长和分化的因素考察
第二节 液体培养条件的选择
第三节 液体转固体条件的选择
第四节 原球茎的纯化和几个变种的形态观察
第三章 24种真菌对液体培养铁皮石斛原球茎的影响
第一节 诱导子对铁皮石斛原球茎生长量的影响
第二节 诱导子处理的原球茎的免疫和抗肿瘤药理作用
第三节 诱导子对铁皮石斛原球茎多糖含量的影响
第四章 24号真菌的特性研究
第一节 在不同培养基上的形态研究
第二节 ST序列的测定
第五章 24号真菌对铁皮石斛原球茎成分的影响的化学分析
第一节 24号真菌对原球茎石斛总生物碱含量的影响
第二节 原球茎中被诱导成分的TLC分析
第三节 24号真菌诱导子处理的原球茎的HPLC图谱
第六章 铁皮石斛原球茎不发育系的建立与培养
第一节 单一胚系的原球茎培养系的建立
第二节 株系筛选的回复实验
第三节 不发育系的形态观察
第七章 24号真菌对铁皮石斛不发育系生长和石斛总碱含量的影响
第八章 24号真菌诱导子对铁皮石斛原球茎胞外的碱化作用与细胞电镜观察
第一节 24号真菌诱导子诱导的原球茎的细胞外碱化作用
第二节 酸碱磷酸酶的细胞电镜观察
第九章 24号真菌诱导子对原球茎细胞结构的影响
第一节 环境扫描电镜观察诱导子对原球茎表面的影响
第二节 原球茎细胞壁的变化和过氧化物酶所起的作用
第十章 24号真菌诱导子对铁皮石斛原球茎的酶活性的影响
第一节 诱导子对原球茎中苯丙氨酸解胺酶活性的影响
第二节 真菌诱导子对过氧化物酶的影响
第三节 诱导子对原球茎脂氧合酶活性的影响
第十一章 原球茎苯丙烷物质代谢途径相关基因研究初探
主要结论
致谢
发布时间: 2006-10-13
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