论文摘要
龋病是人类的常见病、多发病之一，在各种疾病的发病率中，龋病位居前列。WHO 2002～2003年度公布的最新资料显示，虽然发达国家在近30年来龋病的发病率一直处于下降趋势，但是在一些发展中国家，龋病仍呈上升趋势，龋病的防治任务是非常艰巨的，探讨与龋病病因及防治的相关问题，仍十分必要。CCL28又称MEC（mucosa associated epithelia chemokine，粘膜相关上皮趋化因子），是近年来发现的CC家族趋化因子，其受体为CCR10和CCR3。CCL28的mRNA主要分布于唾液腺、前列腺、乳腺、脾和结肠，少量分布于外周血液白细胞和其他粘膜组织。CCL28是IgA抗体分泌细胞（IgA+ASC）有效化学引诱物，从各种粘膜淋巴器官和外分泌腺组织中，CCL28引导IgA+ASC自血循环迁徙归巢至局部组织中。可见，CCL28在机体粘膜局部防御过程中发挥着重要作用。此外，CCL28的抗微生物活性和粘膜富集特性，与粘膜其他抗微生物因素一起产生协同效应，构成了广谱的抗微生物保护层。在前期研究中，我们已成功在JM109（DE3）中诱导表达出C端含有6个组氨酸标签的SBR融合蛋白，并纯化得到可用作防龋重组抗原疫苗的SBR融合蛋白。在本实验中，将变形链球菌SBR融合蛋白经涎腺注射和减毒沙门氏菌胃灌注对小鼠做接种免疫，采用酶联免疫吸附实验、RT-PCR方法和原位杂交技术检测颌下腺内CCL28相对表达情况，探讨防龋疫苗在涎腺局部以及远处粘膜接种后涎腺组织中CCL28的表达变化，阐明疫苗防龋的作用机制。方法：1)采用纯化的变形链球菌SBR融合蛋白作为亚单位疫苗靶向颌下腺注射免疫BALB／C小鼠，酶联免疫吸附实验（ELISA）检测特异性抗体指标，同时应用RT-PCR方法和原位杂交技术检测接种后颌下腺内CCL28相对表达情况；2)采用减毒沙门氏菌经小鼠灌胃后，采用原位杂交技术检测颌下腺内CCL28相对表达情况。结果：1) ELISA结果表明：纯化的SBR融合蛋白靶向颌下腺区域免疫不仅能够显著诱导血清中特异性抗SBR-IgG抗体（P＜0.05），而且还能够诱导唾液中特异性抗SBR-IgA抗体；2) RT-PCR结果表明免疫之后，小鼠颌下腺内CCL28mRNA的表达量均要比未免疫组高；3) ISH结果表明：变形链球菌SBR融合蛋白经涎腺免疫后和减毒沙门氏菌胃灌注后，小鼠颌下腺内CCL28表达量均要比未免疫组高。结论：1)本实验所表达及纯化的变形链球菌SBR亚单位疫苗经颌下腺接种途径可诱导明显的抗体应答；2)变形链球菌SBR亚单位疫苗在颌下腺作局部免疫接种，不但可诱导抗体应答，还可促进CCL28表达增高；3)减毒沙门氏菌经小鼠灌胃后，小鼠颌下腺内CCL28表达量增高。