牛乳铁素的制备分离纯化及其抗菌活性的研究

论文摘要

牛乳铁素是牛乳铁蛋白在酸性环境下经胃蛋白酶作用N端释放的一段由25个氨基酸组成的多肽,具有抗菌、抗病毒、抑制肿瘤细胞生长、调控基因表达、调节免疫等功能。牛乳铁素作为抗菌肽应用于食品、保健品、医药等行业,具有广阔的应用和开发前景。本研究采用离子交换方法,结合离心、超滤以及冷冻干燥等工艺实现了高纯度牛乳铁素的制备。在测定牛乳铁素最小抑菌浓度的基础上研究了几种常用食品添加剂对其抗菌活性的影响。另外还初步进行了牛乳铁蛋白抗炎性能的研究。实验结果表明:酶解牛乳铁蛋白制备乳铁素的最佳酶解条件为:底物浓度为5%（w/v）,酶与底物浓度比为1:30（w/w）,酶解时间为60min。选用截留分子量为10000Da和6000Da的超滤膜进行超滤后,用Butyl-Toyopearl 650M型阳离子交换树脂吸附,pH=5.0的柠檬酸-磷酸缓冲液洗脱,10mM盐酸作为洗脱剂可以得到纯度为95.6%的牛乳铁素（还可分别得到纯度为40.6%、80.5%的LfcinB）。牛乳铁素对大肠杆菌的最小抑菌浓度为15μg/mL,测定了四种合成甜味剂,四种天然甜味剂,四种防腐剂对牛乳铁素抗菌活性的影响。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1.1 课题的研究背景
• 1.2 LfcinB 的国内外研究进展
• 1.3 开展此课题的依据
• 1.4 开展本课题的意义
• 第二章 材料和方法
• 2.1 牛乳铁素粗品的制备
• 2.2 牛乳铁素的分离与纯化
• 2.3 纯化条件的优化
• 2.4 毛细管电泳
• 2.5 氨基酸组分分析
• 2.6 LfcinB 抗菌活性的测定
• 2.7 确定LfcinB 对E.coli 的最小抑菌质量浓度
• 2.8 食品添加剂对 LfcinB 抗菌活性的影响
• 2.9 乳铁蛋白抗炎症活性的初步研究
• 第三章 结果
• 3.1 制备牛乳铁素的最佳酶解条件的确定
• 3.2 纯化条件的优化结果
• 3.3 毛细管电泳结果
• 3.4 氨基酸组分分析结果
• 3.5 LfcinB 的抗菌活性及各种添加剂对它的影响结果
• 3.6 乳铁蛋白的抗炎症实验结果
• 第四章 分析与讨论
• 第五章 结论
• 5.1 建立并优化了酶解 BLf 制备、分离纯化 LfinB 的酶解条件
• 5.2 获得了不同纯度的 LfcinB
• 5.3 建立了分离纯化 LfcinB 的技术路线
• 5.4 研究了 LfcinB 的抗菌活性及食品添加剂对其抗菌活性的影响
• 5.5 初步研究了牛乳铁蛋白的抗炎性能
• 5.6 尚存在的问题及进一步工作设想
• 参考文献
• 论文、参加科研情况说明
• 致谢