周晓景（洛阳市中心医院河南洛阳471000）
【中图分类号】R711.74【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）45-0079-03
周晓景（洛阳市中心医院河南洛阳471000）
【摘要】目的检测基质降解素(MMP-7)及细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）在宫颈鳞癌（CSCC）组织和宫颈上皮内瘤变（CIN）组织中的表达，探讨其与CSCC发生、发展中的作用。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测42例CSCC、30例CIN和21例正常宫颈组织中MMP-7和EMMPRINmRNA的表达。结果CMCC组MMP-7和EMMPRINmRNA的表达均显著高于CIN组（P<0.05）和正常组（P<0.05）,在有淋巴结转移组均高于无淋巴结转移组的表达（P<0.05）。MMP-7与EMMPRIN之间存在正相关（r=0.622,P<0.05）。结论MMP-7和EMMPRIN与宫颈癌侵袭转移密切相关，在宫颈癌的发生、发展中起着重要作用。
【关键词】宫颈鳞癌宫颈上皮内瘤变EMMPRINMMP-7侵袭转移
ExpressionandsignificanceofMMP-7andEMMPRINinCervicalLesions
ZhouXiao-jing(LuoyangshiCentralHospital,Luoyang471000,China)
【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheexpressionofMMP-7andEMMPRINincervicalsquamouscellcarcinoma(CSCC)andcervicalintraepithelialneoplasia（CIN）,andtoexploretheroleofEMMPRINandMMP-7ininvasionandmetastasisofCSCC.MethodEMMPRINandMMP-7mRNAlevelwereexaminedin42casesofCSCC、30casesofCINand21casesofnormalcervixbysemi-quantitativereversetranscription-polymerasechainreaction(RT-PCR).Result：ThemRNAlevelofMMP-7andEMMPRINwereallsignificantlyhigherinCSCCthanthatofinCINandnormalcervixtissue(P<0.05),andnotablyhigherinnodalmetastasisgroupthanthatofinnon-nodalmetastasisgroup(P<0.05).EMMPRINmRNAlevelwaspositivelyrelatedtoMMP-7mRNAlevel(r=0.062,P<0.05).ConclusionEMMPRINandMMP-7maybeservedasanewsignificantlymarkerinpredictingtheinvasionandmetastasisinCSCC.TheymayplayimportantrolesinprogressionofhumanCSCC,andinthedevelopmentofCSCCfromCIN.
【Keywords】cervicalsquamouscellcarcinomacervicalintraepithelialneoplasiaEMMPRINMMP-7invasionmetastasisr
宫颈癌是全球妇女中仅次于乳腺癌的最常见恶性肿瘤，其中宫颈鳞癌占所有宫颈癌的80%～85%[1]。EMMPRIN对各种基质金属蛋白酶（MMPs）起诱导作用。MMP-7能够降解绝大多数细胞外基质（ECM）成分和其他一些底物，与肿瘤的浸润、转移最为密切相关。我们采用RT-PCR技术检测不同病变宫颈组织中EMMPRIN和MMP-7mRNA的表达，探讨EMMPRIN和MMP-7在宫颈鳞癌侵袭、转移中的作用。
1材料和方法
1.1标本
收集CSCC组织42例标本，取标本前未经放、化疗，部分标本在阴道镜下切取。年龄39～79岁，中位年龄41岁。有淋巴结转移15例，无淋巴结转移27例。取30例CINⅡ～Ⅲ患者组织标本。取21例正常宫颈组织作对照。新鲜组织离体后迅速放入RNAguard(上海华舜生物工程有限公司)中保存备用。
1.2半定量RT-PCR
1.2.1提取总RNA并逆转录成cDNA用Trizol(Invitrogen公司)抽提总RNA，用M-MLV第一链cDNA合成试剂盒（ToKoRo公司）逆转录，操作按试剂盒说明书进行。
1.2.2扩增及电泳以cDNA作为模板，用PCR扩增试剂（Promega公司）,以GAPDH为内参照。EMMPRIN引物序列：上游5'CCGGTCAGAGCTACACATTGA3'，下游5'TCTTGCCTTTGTCATTCTGGT3'（290bp）；MMP-7引物序列：上游5’GTGGTCACCTACAGGATCGT3’，下游5’ACCATCCGTCCAGCGTTCAT3’（282bp）；GAPDH引物序列：上游5’TGGGTGTGAACCACGAGAA3’，下游5’GGAATGGACTGTGGTCATGA3’（143bp）。EMMPRIN的PCR反应条件：94℃5min,94℃30s,57℃30s,72℃1min,72℃5min,38个循环。MMP-7和GAPDH的PCR反应条件：94℃5min,94℃30s,59℃30s,72℃1min,72℃5min,38个循环。反应产物在2%琼脂糖凝胶上电泳（80V,40min），EB染色。用Bandscan5.0生物电泳分析软件进行分析。所测指标均与GAPDH灰度值比值作为基因水平相对值进行比较。
1.3统计学分析
数据采用x-±s表示，应用SPSS10.0统计软件进行t检验和Pearson积差相关分析，检验水准α=0.05。
2结果
2.1MMP-7和EMMPRINmRNA在宫颈组织中检测结果
EMMPRIN和MMP-7mRNA在CSCC组织中的表达均显著高于CIN组织及正常织；EMMPRIN和MMP-7mRN在CIN与正常宫颈组织中的表达差异无统计学意义(见表1)；在有转移的宫颈鳞癌组织中的表达显著高于无淋巴转移的宫颈鳞癌组织中的表达。（见表2）。
2.2Pearson积差相关分析EMMPRIN和MMP-7的关联性
EMMPRIN和MMP-7mRNA之间存在正相关（相关系数r=0.622,p<0.05）,随着EMMPRIN表达的增强，MMP-7表达也增强。
表1MMP-7和EMMPRINmRNA在不同宫颈组织中的表达
3讨论
EMMPRIN基因定位于19p13.3。它主要参与细胞与细胞、细胞与基质之间的黏附，通过自分泌及旁分泌诱导肿瘤微环境中MMPs[2,3]的含量及活性的改变，破坏天然组织的机械屏障，降解细胞外基质，从而有利于肿瘤细胞的浸润和转移。本实验研究结果中EMMRIN在宫颈鳞癌组织中的表达显著高于在CIN及正常组织中的基因表达，进一步揭示了EMMPRIN与恶性肿瘤侵袭或转移潜能密切相关。MMP-7基因位于11q21～22，是MMPs家族中分子量最小的成员，具有强大的基质降解活性和广泛的底物特异性，同时受TIMP负调节最小。以往研究显示MMP-7酶原由肿瘤细胞分泌[4，5],由MMP-3、MMP-10激活，自身亦可激活MMP-2、MMP-9，而MMP-2和MMP-9已被大量实验证明与宫颈癌及其它恶性肿瘤的侵袭、转移及预后密切相关。在许多上皮性肿瘤中，MMP-7蛋白的高表达与生存率相关[6]，说明MMP-7是癌症的一个独立预后因素。本研究显示：在子CSCC组织中MMP-7mRNA的表达显著高于其在CIN及正常宫颈组织中的表达,且与文献报导一致[7]；在CIN组织中MMP-7mRNA的表达稍高于在正常组织中表达，使不典型上皮细胞具有浸润的倾向，但在CIN病变期机体的免疫机制等抗癌因素还比较强，使MMP-7在一个比正常稍高而远低于癌变组织中的水平，因而CIN常自然消退，很少发展为浸润癌。
有研究[8]提示：EMMPRIN是通过丝裂酶原激活信号途径刺激MMPs的合成及分泌。本试验通过Pearson积差相关分析发现，EMMPRIN与MMP-7在宫颈癌组织中的表达具有显著正相关,提示EMMPRIN很可能诱导宫颈癌组织合成及分泌MMP-7。因此，有必要进一步研究EMMPRIN与MMP-7在CSCC和CIN发生、发展中的作用及机制，以进行合理化、针对性治疗。推测在临床上采用一定的干预措施如基因沉默、反义核酸技术等阻断EMMPRIN对MMP-7等MMPs的诱导作用，有可能限制肿瘤的浸润转移，提高患者的生存率。
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