柑橘内生细菌YS-45在油菜上的定殖及对菌核病的防效

论文摘要

枯草芽孢杆菌（Basillus subtilis）可以产生内生芽孢,抗逆性强,能够防治多种植物病害,如棉花黄萎病,水稻稻瘟病,小麦全蚀病,烟草青枯病等。在防治病害的同时,许多菌株具有促进生长和增产的作用,同时对环境和动物安全。张志元从广东梅州、重庆北碚、湖南石门采集柑、橙、柚健康植株的枝条分离内生细菌,从中筛选到对油菜菌核菌具有拮抗作用的内生细菌分离物,并将抑菌活性最强的分离物YS-45鉴定为枯草芽孢杆菌（Basillus subtilis）。本文研究了YS-45菌株的生物学特性,通过培育油菜无菌苗和盆栽苗,用浸根接种方法研究了YS-45菌株在芽期无菌苗和苗期盆栽苗油菜内定殖,研究芽期无菌苗和苗期盆栽苗对油菜菌核病的防治效果,主要结果如下:1.通过种子带菌率调查和种子带菌量的调查,油菜种子内生菌带率高,不宜直接供作无菌苗培养,而应该选用带菌率低和带菌数少的油菜品种,再辅助浓度为1000mg/l地无菌-1‰升汞外植体杀菌消毒剂来培育无菌苗。实验结果证明,油菜种子内生菌带菌率除M004较低只有30.0%外,其它品种都高达55.0%～85.0%;M004种子带菌量为1.5×105cfu/g也是最少的,最多的98C04为6.0×105cfu/g。2.YS-45菌株生长特性研究结果表明该菌株最适生长pH值为7.0;最适生长温度为30℃;在20W紫外灯不同时间照射下生长逐步减缓;随着培养时间的延长,总菌数持续的增加,36h后趋于稳定,而活菌数在36h时达到峰值,之后则大幅度减少,所以YS-45菌株在24h～36h内处于稳定的生长期。3.为研究定殖,对YS-45菌株进行了抗卡那霉素突变筛选。筛选出在70μg/ml卡那霉素中能稳定生长的突变菌株,且菌落形态和对油菜菌核菌的拮抗作用保持不变,并通过抗生素的标记,判断定殖能力。结果表明:以1.2×109cfu/ml浓度的YS-45抗药菌悬浮液灌根就能侵入定殖油菜无菌苗,无菌苗带菌数为1.3×105cfu/g。4.定殖YS-45的盆栽苗比定殖YS-45的无菌苗的抗菌核病效果更好。芽期定殖YS-45的无菌苗接种油菜菌核病后发病率和病情指数只有76.1%和47.4,而对照的发病率和病情指数则分别是95.7%和80.6,定殖YS-45的无菌苗的防治效果为41.2%,发病较轻;苗期定殖1.2×109cfu/ml浓度YS-45的盆栽苗发病率和病情指数最低,仅有61.4%和16.3,定殖0.6×109cfu/ml浓度YS-45的盆栽苗发病率和病情指数次之,对照发病率和病情指数最高为84.7%和44.2,定殖1.2×109cfu/ml浓度YS-45的盆栽苗和定殖0.6×109cfu/ml浓度YS-45的盆栽苗的防治效果分别为63.0%和54.3%,发病也较轻。枯草芽孢杆菌YS-45对油菜菌核菌具有较强的抑制活性,并能从根部进入油菜植株内定殖,因此它是一种理想的生防菌。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1 细菌在植物病害生物防治中的应用
• 1.1 生防细菌的种类
• 1.2 生防细菌在植物病害中的应用
• 1.2.1 棉花黄萎病
• 1.2.2 水稻稻瘟病
• 1.2.3 小麦全蚀病
• 1.2.4 烟草青枯病
• 1.2.5 油菜菌核病
• 2 微生物在植株内定殖研究及应用与展望
• 2.1 微生物在植株内定殖的研究
• 2.1.1 在宿主内的流动性
• 2.1.2 在特定宿主的寄生性
• 2.1.3 在宿主特定部位的寄生性
• 2.1.4 不同微生物定殖的差异性及相互的影响等
• 2.2 微生物定殖在植病生防中的应用
• 2.3 微生物定殖研究中存在的问题和展望
• 3 研究目的与意义
• 4 枯草芽孢杆菌防病机理研究进展
• 4.1 对生态位和营养等的竞争
• 4.2 对病原菌的溶菌或抑菌作用
• 4.3 分泌拮抗物质
• 4.4 PGPR和诱导抗性等
• 5 枯草芽孢杆菌研究展望
• 第二章 油菜无菌苗的培育
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 供试油菜品种
• 1.1.2 供试药剂
• 1.1.3 供试菌株
• 1.1.4 培养基
• 1.2 方法
• 1.2.1 种子带菌率检测
• 1.2.2 种皮和胚带菌率检测
• 1.2.3 种子带菌量检测
• 1.2.4 杀菌剂的药效测试
• 2 结果与分析
• 2.1 不同品种油菜种子带菌率
• 2.2 不同品种油菜种皮与胚带菌率
• 2.3 不同品种油菜种子带菌量
• 2.4 杀菌剂的筛选
• 3 讨论
• 3.1 油菜种子内生菌带率高
• 3.2 种子内生菌带率与油菜抗感品种的关系
• 3.3 油菜种子中所带内生菌种群
• 3.4 地无菌是最好的外植体辅助杀菌消毒剂
• 第三章 YS-45菌株在油菜无菌苗上的定殖
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 供试油菜品种
• 1.1.2 供试菌株
• 1.1.3 供试药剂
• 1.1.4 培养基
• 1.2 方法
• 1.2.1 生物学特性
• 1.2.2 抗卡霉素突变菌株的筛选
• 1.2.3 突变菌株对油菜菌核病菌的抑菌作用
• 1.2.4 YS-45菌株在无菌苗上定殖力测定
• 1.2.5 定殖菌YS-45的回收及鉴定
• 2 结果与分析
• 2.1 生物学特性
• 2.1.1 YS-45生长曲线
• 2.1.2 pH值对YS-45生长的影响
• 2.1.3 温度对YS-45生长的影响
• 2.1.4 紫外光对YS-45生长的影响
• 2.2 突变菌株的筛选
• 2.3 标记YS-45菌株平板抑菌圈大小测定
• 2.4 YS-45菌种的鉴定
• 2.5 YS-45菌株在油菜无菌苗内定殖力检测
• 3 讨论
• 3.1 YS-45菌株的生物学特性
• 3.2 突变菌株的筛选
• 3.3 YS-45菌株无菌苗内定殖的研究
• 第四章 YS-45菌株定殖苗对油菜菌核病的防效
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 供试油菜品种
• 1.1.2 供试菌株
• 1.1.3 培养基
• 1.2 方法
• 1.2.1 无菌苗上的防治效果
• 1.2.2 盆栽苗上的防治效果
• 2 结果与分析
• 2.1 定殖YS-45无菌苗的抗病效果
• 2.2 定殖YS-45盆栽苗的抗病效果
• 3 讨论
• 3.1 YS-45定殖盆栽苗的抗菌核病效果更好
• 3.2 成株期对油菜菌核病的防效
• 第五章 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 作者简历