海带根中α-glucosidase和PTP-1B靶向生物活性物质的分离纯化及其抗糖尿病作用研究

论文摘要

海带根是一种治疗糖尿病的民间中药,在沿海地区有很长的民间用药历史。食用海带根能够有效降低糖尿病患者的血糖,起到治疗作用。本文目的在于发现海带根中抗糖尿病的天然活性物质并分析它们在糖尿病治疗中的靶点;进一步开发一种低价且无毒副作用的化学类新药或中药新药。α-glucosidase和PTP-1B是II型糖尿病的两个重要靶点,海带根提取物能同时作用于这两个靶点。通过抑制这两种酶,降低血糖水平,85%乙醇粗提物对两种酶的IC50分别为1589ug/ml、IC50 1271ug/ml。乙酸乙酯相和石油醚相分别抑制α-glucosidase和PTP-1B,IC50分别为380ug/ml和220ug/ml。因此以α-glucosidase和PTP-1B的抑制活性为导向,用天然产物化学的方法对活性成分进行追踪分离,寻找单体活性物质进而鉴定其结构。由于乙酸乙酯相具有α-glucosidase抑制活性,用硅胶柱层析（石油醚:丙酮5:1、1:1）,（二氯甲烷:甲醇60:1、20:1、5:1）,凝胶柱层析Sephadex LH20（二氯甲烷:甲醇1:1）,HPLC （80%甲醇-水）,对α-glucosidase抑制剂进行分离,得到组分IC50为3.6ug/ml。用质谱仪和核磁共振确定结构。生物活性测定结果表明α-glucosidase和PTP-1B是两种不同的物质,分别位于乙酸乙酯相和石油醚相。光照实验和高温实验表明抑制α-glucosidase的活性成分对光照和温度敏感。光照48h或者50℃12h而且对α-glucosidase的抑制活性显著降低,TLC检测并用FeCl3显色初步表明抑制α-glucosidase的活性成分可能是多数酚类物质。动物实验显示在1450ug/kg剂量下,乙酸乙酯相能够显著降低糖尿病小鼠血糖,与阴性对照组差异极显著（P<0.01）。表明,海带根提取物在体内和体外均呈现出抗糖尿病活性,是一种潜在的抗糖尿病药物。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 1 研究目的及意义
• 2 海带的药理研究概况
• 2.1 降血压作用
• 2.2 调血脂和降血粘度作用
• 2.3 抗肿瘤作用
• 2.4 抗糖尿病作用
• 3 II 型糖尿病及其治疗靶点、药物
• 3.1 糖尿病研究进展
• 3.2 糖尿病治疗靶点
• 3.3 糖尿病治疗药物进展
• 4 α葡萄糖苷酶（α-Glucosidase）和蛋白酪氨酸磷酸酯酶（PTPase）
• 5 中药治疗糖尿病研究进展
• 5.1 Ⅱ型糖尿病动物模型的建立
• 5.2 中药治疗糖尿病概况
• 第一章 技术方案
• 第二章 α-glucosidase 和PTP-1B靶向生物活性物质的分离纯化
• 第一节 材料与方法
• 1 材料与仪器
• 2 实验方法
• 第二节 结果与分析
• 1 海带根活性成分的提取、分离
• 2 光敏感性和温度敏感性研究
• 3 样品的大量制备
• 第三节 结论
• 第三章 海带根活性成分抗糖尿病作用研究
• 第一节 材料与方法
• 1 主要试剂与仪器
• 2 实验方法
• 第二节 结果与分析
• 1 粗提物对α-glucosidase 和PTP-1B的抑制效果
• 2 对乙酸乙酯相的活性追踪分离及活性测定
• 3 有效成分的降糖作用观察
• 第三节 结论
• 第四章 讨论
• 参考文献
• 发表文章
• 致谢