鸡蛋中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺残留检测方法及其消除规律的研究

论文摘要

本研究以京海黄鸡产蛋鸡为试验素材,建立了鸡蛋中甲砜霉素、氟苯尼考及代谢物氟苯尼考胺残留的高效液相色谱荧光检测方法。同时通过该产蛋鸡分别以20 mg·kg-1·b.w·d剂量内服甲砜霉素和以50mg·kg-1·b.w·d剂量内服氟苯尼考,每天1次给药,连续5d,研究了蛋清、蛋黄、全蛋中甲砜霉素、氟苯尼考及代谢物氟苯尼考胺的残留消除规律。研究结果表明:1.建立的甲砜霉素在蛋清、蛋黄及全蛋中的前处理方法和HPLC荧光检测方法,甲砜霉素在蛋清中的回收率在83.43%～91.23%之间,日内和日间RSD均分别低于5.32%和10.75%;甲砜霉素在蛋黄中的回收率在77.46%～82.55%之间,日内和日间RSD均分别低于6.11%和11.23%;甲砜霉素在全蛋中的回收率在86.35%～93.76%之间,日内和日间RSD均分别低于6.62%和10.83%。甲砜霉素在0.025mg·L-1～5.0mg·L-1范围内线性关系良好（r=0.9997,n=8）,检测限为3μg·kg-1,可满足鸡蛋中甲砜霉素残留检测的要求。2.建立的氟苯尼考和氟苯尼考胺在蛋清、蛋黄及全蛋中的前处理方法和HPLC荧光检测方法,蛋清中氟苯尼考和氟苯尼考胺的回收率分别在81.36%～97.87%和83.71%～97.14%之间,日内RSD分别低于6.34%和5.62%,日间RSD分别低于11.35%和11.51%;蛋黄中氟苯尼考和氟苯尼考胺的回收率分别在74.36%～87.45%和79.61%～97.23%之间,日内RSD分别低于7.37%和5.82%,日间RSD分别低于12.52%和10.36%;全蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺的回收率分别在87.41%～92.29%和89.01%～95.15%之间,日内RSD分别低于6.73%和5.82%,日间RSD分别低于10.48%和10.52%。氟苯尼考在0.01～10.0mg·L-1范围内线性关系良好（r=0.9997,n=9）;氟苯尼考胺在0.0025mg/L～2.50mg·L-1范围内线性关系良好（r=0.9998,n=9）,氟苯尼考和氟苯尼考胺的检测限分别为3μg·kg-1和1μg·kg-1,可满足鸡蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留检测的要求。3.建立的同时测定甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺在蛋清、蛋黄及全蛋中的前处理方法和HPLC荧光检测方法,蛋清中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的回收率分别在83.85%～92.41%、81.21%～97.64%和81.26%～87.61%之间,蛋黄中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的回收率分别在86.65%～93.23%、87.83%～92.27%和89.56%～95.86%之间,全蛋中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的回收率分别在77.56%～91.94%、74.82%～87.38%和78.87%～97.36%之间。甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的检测限分别为3μg·kg-1、3μg·kg-1和1μg·kg-1。可满足同时测定鸡蛋中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺残留检测的要求。4.研究了产蛋鸡以20mg·kg-1·b.w·d的剂量,连续5d,每天1次内服甲砜霉素后鸡蛋中甲砜霉素的残留消除规律。结果表明:在用药期间,蛋清、蛋黄和全蛋中的甲砜霉素含量随着用药天数的增加逐渐增大,均在停药第1d达到最大值,其含量分别为0.15721mg·kg-1、0.18221mg·kg-1和0.13732mg·kg-1,且蛋清中甲砜霉素含量高于蛋黄中甲砜霉素含量;在停药期间,蛋清、蛋黄和全蛋中的甲砜霉素含量随着停药天数的延长其含量逐渐减小,停药前期,其残留消除快,停药后期,其残留消除缓慢,停药5d后,蛋清中甲砜霉素残留低于检测限(3μg·kg-1);停药7d后,全蛋中甲砜霉素含量低于检测限(3μg·kg-1);停药8d后,蛋黄中甲砜霉素含量低于检测限(3μg·kg-1);且蛋黄中甲砜霉素残留比蛋清中残留消除缓慢,消除时间长。5.研究了产蛋鸡以50mg·kg-1·b.w·d的剂量,连续5d内,每天1次内服氟苯尼考后鸡蛋中氟苯尼考及代谢物氟苯尼考胺的残留消除规律。结果表明:在用药期间,蛋清、蛋黄和全蛋中的氟苯尼考和氟苯尼考胺含量随着用药天数的增加逐渐增大,在停药第1d,蛋清、蛋黄及全蛋中氟苯尼考含量达到最大值,其含量分别为0.66201mg·kg-1、0.75733mg·kg-1和0.70227mg·kg-1。氟苯尼考胺在蛋清的最高残留量也出现在停药第1d,其含量为0.36863mg·kg-1,氟苯尼考胺在全蛋的最高残留量也出现在停药第2d,其含量为0.63869mg·kg-1,但蛋黄中氟苯尼考胺的最高残留量出现在停药第3d,其含量为0.95047mg·kg-1。在停药期间,蛋清、蛋黄和全蛋中的氟苯尼考及氟苯尼考胺含量随着停药天数的延长其含量逐渐减小,停药第5d,蛋清中氟苯尼考胺含量低于检测限(1μg·kg-1);停药第6d,蛋清中氟苯尼考含量低于检测限(3μg·kg-1);停药第9d,全蛋中氟苯尼考含量低于检测限(3μg·kg-1);停药第10d,蛋黄中氟苯尼考及氟苯尼考胺含量均分别低于检测限(3μg·kg-1和1μg·kg-1),全蛋中氟苯尼考胺含量低于检测限(1μg·kg-1)。且蛋黄中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留比蛋清中残留消除缓慢,消除时间长。6.参考欧盟药品评审管理局（EMEA）关于甲砜霉素和氟苯尼考（以氟苯尼考和氟苯尼考胺总和计）在鸡肉中的最高残留限量（MRLs）标准(甲砜霉素为50μg·kg-1,氟苯尼考为100μg·kg-1),建议产蛋鸡以20mg·kg-1·b.w·d的剂量连续5d,每天1次内服甲砜霉素时,其休药期（WDT）为4d;建议产蛋鸡以50mg·kg-1·b.w·d的剂量连续5d,每天1次内服氟苯尼考时,其WDT为7d。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 本文常用英文缩写词
• 第一部分 文献综述
• 第二部分 研究内容
• 1. 引言
• 2. 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 试验动物及分组
• 2.1.2 药品与试剂
• 2.1.3 试剂配置
• 2.1.4 仪器设备
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 样品前处理方法的建立
• 2.2.1.1 蛋清样品前处理方法的建立
• 2.2.1.2 蛋黄样品前处理方法的建立
• 2.2.1.3 全蛋样品前处理方法的建立
• 2.2.2 样品检测方法的建立
• 2.2.2.1 色谱条件
• 2.2.2.2 标准曲线的确定
• 2.2.2.3 样品回收率的测定
• 2.2.2.4 检测限与定量限的确定
• 2.2.2.5 精密度的测定
• 2.2.3 甲砜霉素、氟苯尼考及代谢物氟苯尼考胺残留消除规律研究
• 2.2.3.1 给药剂量、途径及样品采集
• 2.2.3.2 鸡蛋中甲砜霉素、氟苯尼考及代谢物氟苯尼考胺残留量的测定
• 2.3 数据处理
• 3. 结果与分析
• 3.1 色谱操作条件
• 3.1.1 TAP 的色谱分离
• 3.1.2 FF 及 FFA 的色谱分离
• 3.1.3 TAP、FF 及FFA 的色谱分离
• 3.2 标准曲线与线性范围的确定
• 3.2.1 甲砜霉素的标准曲线与线性范围
• 3.2.2 氟苯尼考的标准曲线与线性范围
• 3.2.3 氟苯尼考胺的标准曲线与线性范围
• 3.3 鸡蛋中样品回收率的测定
• 3.3.1 鸡蛋中甲砜霉素回收率的测定
• 3.3.2 鸡蛋中氟苯尼考回收率的测定
• 3.3.3 鸡蛋中氟苯尼考胺回收率的测定
• 3.3.4 同时提取鸡蛋中甲砜霉素、氟苯尼考及氟苯尼考胺时回收率的测定
• 3.4 精密度的测定
• 3.4.1 甲砜霉素精密度的测定
• 3.4.2 氟苯尼考精密度的测定
• 3.4.3 氟苯尼考胺精密度的测定
• 3.5 灵敏度的测定
• 3.6 鸡蛋中甲砜霉素、氟苯尼考及氟苯尼考胺的残留消除规律
• 3.6.1 甲砜霉素在鸡蛋中的残留消除规律
• 3.6.2 氟苯尼考在鸡蛋中的残留消除规律
• 3.6.3 氟苯尼考胺在鸡蛋中的残留消除规律
• 3.6.4 氟苯尼考与氟苯尼考胺在鸡蛋中的残留消除规律
• 4. 讨论
• 4.1 色谱条件的选择及优化
• 4.1.1 检测方法的选择
• 4.1.2 检测器的选择
• 4.1.3 检测波长的筛选
• 4.1.4 流动相的优化
• 4.1.5 标准品的配制
• 4.1.6 样品的提取与浓缩
• 4.1.7 方法的回收率
• 4.1.8 方法的灵敏度
• 4.2 甲砜霉素、氟苯尼考及氟苯尼考胺在鸡蛋中的残留消除规律
• 4.2.1 甲砜霉素在鸡蛋中的残留消除规律
• 4.2.2 氟苯尼考在鸡蛋中的残留消除规律
• 4.2.3 氟苯尼考代谢物氟苯尼考胺在鸡蛋中的残留消除规律
• 4.2.4 氟苯尼考和氟苯尼考胺在鸡蛋中的残留消除规律
• 5. 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表论文及获得专利情况