论文摘要
目的:观察瘦素在体外对人前脂肪细胞增殖和分化的影响,探讨瘦素在肥胖发生中的可能作用机制。方法:（1）采用胶原酶消化法从人腹部皮下脂肪中分离出前脂肪细胞,并观察体外培养的人前脂肪细胞增殖和分化过程。通过观察细胞的形态学变化、生长曲线以及油红O对细胞内脂质染色对细胞进行鉴定。（2）分别用低、中、高三种不同浓度的瘦素（10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml）对培养的人前脂肪细胞进行干预,培养24h、48h、72h时用MTT法和细胞计数法检测细胞增殖情况。（3）分别用低、中、高三种不同浓度的瘦素（10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml）对分化培养中的前脂肪细胞进行干预,在分化的第4d、8d、16d用油红O染色提取法检测瘦素对前脂肪细胞分化的影响;在分化的第8d用RT-PCR检测前脂肪细胞分化转录因子PPARγ2和C/EBPα的mRNA水平。（4）对各组参数进行统计学分析以观察瘦素对人前脂肪细胞增殖和分化的影响。结果: （1）成功分离并培养人前脂肪细胞,观察了它的增殖和分化过程。细胞形态与成纤维细胞相似,增殖期的4-10d为对数增长期;分化培养基培养的第4d可见脂质小滴,脂滴逐渐增多,21d左右大部分分化为成熟脂肪细胞。（2） MTT法检测结果显示高浓度瘦素能够促进前脂肪细胞的增殖,在24h、48h、72h时细胞增殖较对照组分别增加了7%、12.8%和5.7%。低浓度和中浓度瘦素对前脂肪细胞的增殖没有明显的促进作用。通过细胞计数法也发现,高浓度瘦素干预48h能够促进前脂肪细胞的增殖。（3）油红O染色提取法结果表明高浓度瘦素干预4d、8d时能够促进前脂肪细胞的分化,与对照组相比分别增加了13%和23.2%;而在16d时其促进作用不显著。低浓度和中浓度瘦素对前脂肪细胞的分化均没有明显的促进作用。RT-PCR结果也发现,高浓度瘦素干预8d时前脂肪细胞分化转录因子PPARγ2和C/EBPα的mRNA表达较对照组增加。结论: （1）成功地提取和培养了人腹部皮下前脂肪细胞,为研究各种激素和药物等对前脂肪细胞的作用提供了实验细胞模型。（2）在体外超生理浓度的瘦素能够促进前脂肪细胞的增殖和分化,提示生理状态下,瘦素可能主要通过作用于摄食中枢和影响脂肪细胞的脂质代谢来影响体脂平衡,对脂肪细胞的产生作用甚微;瘦素抵抗、血清高瘦素浓度等病理状态时,瘦素可能影响前脂肪细胞的增殖及进一步分化为脂肪细胞,调节肥胖发生。