Visfatin基因过表达对大鼠胰岛素敏感性，FGF-21及脂代谢的影响

论文摘要

目的:构建大鼠内脏脂肪素（visfatin）基因pcDNA3.1（+）真核表达载体并转入大鼠,观察visfatin基因过表达对正常饮食及高脂饮食大鼠胰岛素敏感性,FGF-21和糖脂代谢的影响。方法:1、构建pcDNA3.1（+）– visfatin真核表达质粒。2、将pcDNA3.1（+）-visfatin质粒转入正常饮食（NT组）及高脂饮食（HT组）大鼠,并以正常饮食pcDNA3.1（+）空质粒（NC组）为对照,采用正糖-高胰岛素钳夹技术评价大鼠胰岛素敏感性改变,同时测定血糖、血脂、血浆visfatin和FGF-21的变化。3、用dot-blot方法测定肝脏、脂肪、肌肉组织IRS1的磷酸化水平。4、用RT-RCR和Westernblot方法测定肝脏和脂肪组织脂代谢相关基因及蛋白水平的变化。结果:1、成功构建了重组质粒pcDNA3.1（+）- visfatin。2、质粒转染后3天,NT组和HT组大鼠血浆visfatin水平均明显升高（P<0.01）,NT组血浆基础胰岛素水平明显降低（P<0.05）,葡萄糖输注率较转染前显著升高（P<0.01）。肝脏、脂肪、肌肉组织IRS1磷酸化的水平明显增高（P<0.05）,NT组和HT组大鼠肝脏PPARγmRNA的表达均明显升高（分别为P<0.05和P<0.01）,NT组大鼠脂肪组织PPARγmRNA亦显著升高（P<0.01）,而HT组则仅有升高趋势（P>0.05）;3、与质粒转染前相比,各处理组大鼠血浆总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平明显降低（P<0.05）。SREBP2 mRNA表达均明显高于对照组（P<0.05）, NT组HMG CoA还原酶mRNA水平明显高于NC组和HT组（P<0.05）,NC组与HT组无明显差异;4、NT组大鼠脂肪组织ATGL mRNA及蛋白水平均明显高于NC组和HT组（P<0.05）,且HT组高于NC组,但无统计学意义。5、与质粒转染前比较,NT组大鼠血浆FGF-21水平明显下降（P<0.05）,而HT组大鼠血浆FGF-21水平明显升高（P<0.05）;肝脏FGF-21 mRNA及蛋白水平变化与血浆FGF-21变化趋势一致。结论:1、成功构建了重组质粒pcDNA3.1（+）-visfatin。2、重组质粒使血浆visfatin水平明显升高,增强了大鼠胰岛素敏感性,血浆总胆固醇水平明显下降,并提高了脂肪组织ATGL mRNA及蛋白水平,同时对FGF-21的表达产生极大的影响。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一部分 VISFATIN 基因的扩增、真核表达质粒构建及鉴定
• 1 材料与方法
• 2 实验结果
• 3 讨论
• 第二部分 VISFATIN 基因过表达对大鼠胰岛素敏感性的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第三部分 VISFATIN 基因过表达对糖脂代谢的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 文献综述
• 致谢
• 研究生期间发表的文章