二苯乙烯苷对老龄大鼠脑缺血再灌注损伤后HIF-1α及EPO蛋白表达的影响

论文摘要

背景与目的：脑缺血再灌注损伤后病灶区由缺血中心区及其周围的缺血半暗区组成。目前认为缺血中心区的神经元死亡形式是坏死,神经细胞的死亡是不可逆的；而缺血半暗区神经元死亡的主要形式是凋亡,在一定条件下,神经细胞的死亡是可逆的,因此缺血性脑损伤的治疗关键在于挽救缺血半暗区濒临凋亡的神经元。低氧诱导因子-1α（HIF-1α）是在缺氧条件下广泛存在于哺乳动物及人体的一种转录因子。近年来,越来越多的证据显示,HIF-1α在脑缺血再灌注损伤中具有保护作用,且HIF-1α的这种保护作用主要是通过对其相应的靶基因的调节而产生的。促红细胞生成素（EPO）是受缺氧调节的糖蛋白激素,是HIF-1α下游一个靶基因编码的蛋白,EPO能通过上调bcl-2、bcl-xl基因表达、抑制Caspase-9的表达、抑制NO过度合成、抗谷氨酸兴奋的神经毒性、抑制细胞色素c的释放等多条途径发挥脑保护作用。已有研究显示,脑缺血耐受可诱导缺血脑组织内源性HIF-1α及EPO的表达增加,减少脑梗死的体积。中药何首乌（polygonum multiflorum thunb）及其活性成分二苯乙烯苷（tetrahydroxystilbene glucoside,简称TSG）对脑缺血性损伤具有保护作用,但具体作用机制仍不十分明确。本研究将以二苯乙烯苷为干预手段,在大鼠脑缺血再灌注损伤模型上,通过观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后缺血周边区HIF-1α、EPO及凋亡细胞的表达变化,结合病理、神经功能缺损程度等方面,探讨该药在脑缺血再灌注损伤中脑保护作用的可能机制,以期为脑缺血的治疗以及新药的开发提供实验基础。方法：400-500g清洁级健康雄性SD大鼠,鼠龄20个月。分为3组：对照组（n=24）,模型组（n=24）,TSG组（n=24）。TSG以剂量60mg/kg/d灌胃,给药体积5ml/kg/d,模型组以相同体积的生理盐水灌胃,第七天灌胃后1h行Longa线栓法制备大脑中动脉栓塞模型（MCAO）。按Longa的5级标准评分法评价神经功能缺损,再灌注6小时、24小时、48小时、7天四个时间点处死大鼠。分别采用HE染色观察缺血周边区病理学变化；免疫组织化学法检测HIF-1α及EPO的表达,原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法（TUNEL）检测神经细胞凋亡。结果：1、TSG组大鼠神经功能缺损程度除6小时组外其余时间点均低于模型组。2、TSG组与模型组再灌注24小时的HE染色均显示出典型的坏死灶和神经元丢失。3、对照组各时间点检测到少量HIF-1α及EPO的表达。模型组与TSG组HIF-1α及EPO的表达变化趋势基本一致,HIF-1α在再灌注6小时后表达增加,24小时达到高峰,48小时表达明显下降,7天少量表达；EPO在再灌注6小时后表达明显增加,48小时达高峰,7天表达明显下降。4、对照组检测到少量凋亡细胞；模型组与TSG组再灌注6h后凋亡细胞开始增多,与正常组及假手术组比较差异显著,24小时达高峰,48小时、7天仍有表达。与模型组对比,TSG组减少再灌注各时间点的细胞凋亡。结论：二苯乙烯苷可能通过诱导老龄大鼠脑缺血再灌注损伤后HIF-1α蛋白表达上调,进而上调EPO的表达,减少细胞凋亡。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略词表
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 主要试剂与药品
• 2.2 实验仪器
• 2.3 实验方法
• 2.4 统计学处理
• 第三章 结果
• 3.1 造模成功大鼠的体征及造模成功率
• 3.2 病理组织学观察
• 3.3 HIF-1α、EPO蛋白及凋亡细胞在缺血侧大脑皮质的表达
• 第四章 讨论
• 4.1 HIF-1α、EPO在脑缺血中的作用以及两者的关系
• 4.2 二苯乙烯苷对脑缺血的保护作用及机制
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间研究成果