论文摘要
目的:评价携带肝细胞生长因子基因的减毒沙门氏菌（Typl-HGF）对TNBS诱发大鼠溃疡性结肠炎模型的治疗效果。方法:1.分别用1×109cfu的减毒沙门氏菌（Ty）,携带绿色荧光蛋白的减毒沙门氏菌（Typl-GFP）、携带肝细胞生长因子基因的减毒沙门氏菌（Typl-HGF）、10%NaHCO30.3ml第0、14、28天灌胃免疫小鼠,末次免疫后7d,分别采集各组动物全血并抗凝,用流式检测抗凝血中CD4+、CD8+、IgM、IgG1、IgA,用ELISA检测血清IgM、IgG1、IgA免疫球蛋白,MTT法检测脾脏B、T淋巴细胞的增殖能力。2.40只Wistar大鼠经TNBS灌肠诱发溃疡性结肠炎模型,并随机分为4组:Ty治疗组、Typl-GFP观察组、Typl-HGF治疗组、模型对照组,每组10只;另设生理盐水灌肠的正常对照组10只。造模后第3d各组灌胃进行治疗,依次给予1×109cfu的Ty、Typl-HGF、Typl-GFP菌液,每只0.5ml,隔日一次,模型和正常对照组给予同体积的100g/L NaHCO3。3次和6次灌胃后1W,分别观察各组大鼠的一般情况、结肠大体观及评分、结肠组织学变化及评分和目的基因表达,用流式细胞仪检测各组外周血CD4+、CD8+、IgM、IgG1、IgA。结果:1.小鼠末次免疫后7d,Typl-HGF实验组CO4+、CD8+、CD4+/CD8+比值降低（p＜0.01、p＜0.05、p＜0.01）。IgM、IgA无统计学意义,IgG1显著升高p＜0.01。2.3、6次灌胃模型组与正常组相比CD4+T细胞无明显变化,但CD8+T细胞下降明显（P＜0.01）;3次治疗组CD4+T低于模型组P＜0.05,3、6次灌胃模型组CD4+/CD8+T比值较正常组升高（P＜0.05）;6次灌胃治疗组CD4+、CD8+均明显低于模型组、对照组（P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05,P＜0.05）,CD4+/CD8+T比值较模型、对照组下降（P＜0.05）。3、6次灌胃模型组与正常组相比IgM、IgG1、IgA明显增加:3、6次对照组与同期模型相比IgM明显增加（P＜0.01）,而6次治疗组与模型组相比IgM、IgG1明显降低（P＜0.05）。3.Typl-HGF治疗组3次灌胃后体重略有增加,较模型对照组平均增加5.31±1.13g,但差异无统计学意义（P＞0.05）,结肠炎常见症状如粘液脓血便、粪便稀等较其它组稍有改善:6次Typl-HGF治疗后动物溃疡性结肠炎常见症状均明显好转,精神萎靡减轻,无便中带血,体重较模型对照组平均增加9.75±2.07g,差异有统计学意义（P＜0.05）,Ty治疗组与模型对照组大鼠症状均无明显缓解。3次和6次Typl-HGF治疗组结肠大体标本积分分别为2.20±0.90和1.70±1.10,明显低于同期Ty治疗组（5.10±1.70,4.00±1.50）和模型对照组（5.30±1.30,4.30±1.20）（P＜0.01）,且3次和6次Typl-HGF灌胃治疗相比较有统计学意义（P＜0.05）。光学显微镜观察可见,3次灌胃后Typl-HGF治疗组与其它组相比,肠组织炎症减轻,溃疡面缩小,并可见粘膜及组织增生现象,组织学评分为3.87±0.76,但与Ty治疗组和模型对照组无明显差别（P＞0.05）;6次Typl-HGF治疗后肠组织病理检查较3次治疗更好,溃疡边可见新生肉芽组织增生,有的甚至溃疡及黏膜已修复,组织学评分为1.60±0.30,而同期模型组标本积分为3.50±0.70,二者之间差异有统计学意义（P＜0.05）,3次和6次Ty治疗组与模型对照组相比无明显改变。Typl-GFP灌胃后在结肠组织可见GFP强表达。结论:1.口服Typl-HGF能降低了小鼠的细胞免疫和体液免疫,对正常小鼠免疫有抑制作用。2.Typl-HGF能明显减轻TNBS诱发溃疡性结肠炎模型大鼠的症状及炎症,对已形成的粘膜损伤及溃疡有促修复作用。同时大鼠实验性结肠炎发病过程中,机体免疫功能处于亢进状态,Typl-HGF能够抑制T增殖和B淋巴细胞抗体的产生,它可能代表了一种新的治疗用于治疗结肠炎疾病。