PAR2在食管癌中的表达及胰蛋白酶对EC109细胞增殖移动的影响

论文摘要

背景和目的蛋白酶活化受体2 protease-activated receptor 2（PAR2）是蛋白酶活化受体（ protease-activated receptors PARs ）家族成员,属于G蛋白偶联受体G protein-coupled receptor （GPCRs）。PAR2被胰蛋白酶（胰酶）活化后,通过细胞间的信号转导,进而影响细胞的生物学行为。现阶段研究表明,PAR2与多种肿瘤的生长和转移有关。尽管已经有不少研究结果表明PAR2在多种恶性肿瘤中有重要的作用,但是其在食管癌组织中的表达和与临床疾病发展的关系及其作用尚未阐明。本文通过研究PAR2在食管癌组织中的表达及其与临床病理和预后的关系,同时研究在食管癌细胞EC109中的表达及其与食管癌细胞增殖移动的关系,从而了解PAR2在食管癌发展中的作用。材料与方法1临床研究对象收集汕头大学医学院附属肿瘤医院2002、2007～2010年间食管癌组织标本124例,其中49例有相对应的癌旁粘膜组织和切缘正常粘膜组织,75例有五年的随访记录（38例接受术后放疗或化疗,37例是单纯的手术治疗）;58例发生淋巴结转移,66例无淋巴结转移;组织学分级Ⅰ级40例,Ⅱ级73例,Ⅲ级11例。2 HE染色（hematoxylin and eosin staining,HE）切片常规HE染色,镜下观察,进行组织学诊断。3免疫组织化学染色（Immunohistochemistry,IHC）ImmunoCruzTM Staining System三步法检测石蜡组织切片中PAR2蛋白的表达情况。二步法检测相同病例的石蜡组织切片中CD34（内皮细胞标记）的表达情况。4细胞系细胞培养技术10%BSA DMEM培养食管癌EC109细胞系。5免疫荧光细胞染色（immunofluorescence cell staining,IIF）用FITC（异硫氰酸荧光素）间接法检测PAR2蛋白的表达情况,荧光显微镜下观察PAR2蛋白在食管癌EC109细胞中的定位。6 MTT（methyl thiazolyl tetrazolium）法检测胰蛋白酶对食管癌EC109细胞的增殖的影响。7细胞迁移实验（cell migration assay） Transwell小室法检测胰蛋白酶对食管癌EC109细胞的移动能力的影响。结果1免疫组化在食管癌组织中, PAR2蛋白主要表达于食管癌癌细胞的胞浆或胞膜上,表达的阳性率为65.3%（81/124）,分别与切缘正常粘膜上皮中表达的阳性率（30.6%,15/49）和癌旁粘膜上皮中表达的阳性率（32.7%,16/49）相比,均有高度的统计学意义（P<0.01）。在组织学分级中Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级的阳性率分别为55%、74%、45.5%。Ⅰ级和Ⅱ级之间的差别有统计学意义（P<0.05）,Ⅱ级和Ⅲ级之间的差别无统计学意义。PAR2蛋白表达阳性的病人的微血管密度为23.59±8.93,表达阴性的病人为23.27±8.17,两者之间差别不大。在单纯手术治疗的病人中,PAR2蛋白表达阳性的病人（28.55±5.43月）生存时间少于PAR2蛋白表达阴性者（32.33±6.49月）,但是差别无统计学意义。2免疫荧光食管癌上皮细胞EC109表达PAR2。3 MTT法胰酶对EC109细胞的增殖作用较复杂。4细胞迁移实验胰酶对EC109细胞的迁移能力有一定的促进作用。结论1. PAR2蛋白在食管癌癌组织中的阳性表达率达65.3%,明显高于切缘正常粘膜上皮和癌旁正常粘膜上皮。Ⅱ级的阳性率明显高于Ⅰ级,提示PAR2的活化对食管癌的较早期发展可能有一定的作用。2. PAR2蛋白在食管癌癌组织中的表达与肿瘤微血管密度没有明显关系,提示在食管癌中,PAR2蛋白的活化可能不是通过影响肿瘤血管的生长而影响肿瘤的发展。3. PAR2蛋白表达阳性的病人生存时间少于PAR2蛋白表达阴性者,统计没有意义。PAR2蛋白表达阳性与病人生存期是否有关还需进一步加大样本进行研究。4. PAR2在食管癌细胞系EC109中有表达,胰酶对食管癌EC109细胞的移动有一定的促进作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略语
• 前言
• 材料与方法
• 1 材料
• 2 方法
• 2.1 HE 染色
• 2.2 免疫组织化学染色
• 2.3 EC109 细胞系培养
• 2.4 免疫荧光染色检测 PAR2 在 EC109 细胞中的表达
• 2.5 MTT 实验检测胰蛋白酶及其抑制剂对 EC109 细胞的影响
• 2.6 细胞迁移实验检测胰蛋白酶及其抑制剂对 EC109 细胞的影响
• 2.7 结果判定
• 2.8 统计学分析
• 结果
• 3.1 免疫组化结果
• 3.3 免疫荧光染色法检测EC109细胞PAR2蛋白表达的结果
• 3.5 MTT法检测胰蛋白酶及其抑制剂对EC109细胞增殖影响的结果
• 3.6 Transwell小室法检测胰蛋白酶及其抑制剂对EC109细胞迁移影响的结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 研究生期间发表文章
• 个人简历