泮托拉唑通过抑制自噬提高胃腺癌细胞株SGC-7901对顺铂化学治疗敏感性及其机制研究

论文摘要

背景和目的：胃癌是常见的消化道恶性肿瘤之一,化学治疗（简称化疗）常常效果欠佳。应用高效低毒性的化疗增敏剂可优化化疗方案,提高化疗效果,减少化疗副作用。其中,质子泵抑制剂（proton pump inhibitors, PPIs）能通过抑制空泡型ATP酶（vacuolar type ATPases, V-ATPases）,逆转肿瘤细胞内外pH梯度,提高化疗药物生物利用率而增强化疗敏感性。最新研究表明PPIs能抑制自噬,本研究探索常用PPI泮托拉唑（pantoprazole, PPZ）是否通过抑制自噬发挥提高胃腺癌对顺铂化疗敏感性及其机制。方法：1)通过电子显微镜观察顺铂（cisplatin, DDP）处理后SGC-7901细胞内超微结构的变化；2)用免疫印迹观察DDP及PPZ处理24h后胃腺癌细胞株SGC-7901中p62表达；3)在荧光显微镜下观察DDP及PPZ处理24h后细胞内荧光标记的LC3的分布及定位；4)在靶向ATG7的siRNA干扰下观察ATG7及p62的表达情况；5)采用CCK-8检测DDP, PPZ, PPZ预处理及siRNA干扰ATG7表达对SGC-7901细胞增殖率的影响；6)用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素-碘化丙啶（Annexin V-FITC-PI）凋亡检测试剂盒检测上述各组细胞凋亡的变化；7)免疫印迹和免疫荧光检测上述处理组中p62、mTOR的蛋白表达。结果：1μg/mlDDP处理24h能明显诱导SGC-7901细胞发生凋亡,并在存活的细胞胞浆中观察到包裹着胞浆内容物的双层膜结构,同时p62的表达明显降低,而标记的LC3红色荧光斑点在胞内的定位明显增多,而80μ g/m1PPZ处理24h能明显增加p62的表达也增加标记的LC3红色荧光斑点,抑制肿瘤细胞自噬,降低细胞增殖率,促进细胞凋亡。采用靶向ATG7的siRNA技术抑制ATG7的表达,p62表达明显增高,标记的LC3红色荧光斑点与饥饿诱导的细胞相比明显减少。siRNA干扰ATG7能明显抑制细胞自噬的发生,并降低肿瘤细胞对顺铂的存活率。PPZ预处理能提高SGC-7901细胞株对顺铂的敏感性并促进细胞凋亡（P<0.05）,但PPZ预处理组与干扰后顺铂处理组相比虽无明显差异,前者的化疗效果要稍微优于后者。PPZ处理及PPZ预处理与相应的对照组相比,mTOR的表达都明显增高,有统计学差异（P<0.05）,且这些结果与p62的表达相一致。结论：1μg/ml DDP能诱导SGC-7901细胞株自噬,并通过靶向ATG7的siRNA抑制自噬后,顺铂对SGC-7901的化疗敏感性增高。80μg/ml PPZ能抑制自噬,并在PPZ预处理后抑制自噬能改善胃腺癌细胞对顺铂的敏感性,提高细胞凋亡率。mTOR可能介导PPZ提高肿瘤细胞死亡和顺铂化疗敏感性。

论文目录

• 摘要
• 英文摘要
• 缩略词表
• 前言
• 第一部分 顺铂对胃腺癌细胞株SGC-7901自噬现象的影响
• 材料
• 方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 附图
• 第二部分 泮托拉唑对胃腺癌细胞株SGC-7901自噬现象的影响
• 材料
• 方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 附图
• 第三部分 泮托拉唑提高胃腺癌细胞株SGC-7901对顺铂化疗敏感性的自噬机制研究
• 材料
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 附图
• 综述
• 参考文献
• 附图
• 作者简介
• 致谢