论文题目: 人胰腺干细胞建系及其诱导胰岛移植治疗大鼠糖尿病的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 临床兽医学
作者: 效梅
导师: 窦忠英
关键词: 胰腺干细胞,扩增,分化,胰岛,移植,糖尿病,人胎儿
文献来源: 西北农林科技大学
发表年度: 2005
论文摘要: 糖尿病是危害人类健康的重大疾病之一,而传统的药物及胰岛素替代疗法却不能从根本上医治该病。近年来,随着免疫抑制剂的改进及细胞移植技术的不断成熟,移植胰岛细胞已成为治愈Ⅰ型和部分Ⅱ型糖尿病的有效途径。但是,由于每个临床胰岛移植受体通常需要2～4 个新鲜尸体胰腺,胰岛供体短缺的矛盾亦更为突出,制约了利用胰岛细胞治疗糖尿病技术的应用。胰腺干细胞(Pancreatic stem cells)是一类存在于胎儿和成年胰腺组织中的成体干细胞,能自我更新,具有多分化潜能,其特点是在自然分化过程中首先分化为胰腺组织的各种细胞。体外分离、克隆人类胰腺干细胞作为种子细胞,并定向诱导其分化为功能性胰岛细胞移植治疗糖尿病,是解决胰岛供体短缺的有效途径。目前,在世界范围内,分离克隆胰腺干细胞并将其定向诱导分化为功能性胰岛细胞移植治疗糖尿病的研究已成为细胞组织工程研究的又一热点。但是,由于胰腺干细胞的存在部位、标记物等还没有完全确定,世界范围内还没有建立公认的胰腺干细胞系。本研究以人流产胎儿胰腺组织为材料,对胰腺干细胞培养体系的建立,胰腺干细胞的形态和表达特征,胰腺干细胞的分化特性及胰腺干细胞体外诱导胰岛移植治疗大鼠糖尿病等方面进行了较为系统的研究,主要内容包括: 1 人胎儿胰腺干细胞培养体系的建立本研究建立1 例人胎儿胰腺干细胞系。以人胎儿胰腺组织为材料,采用0.1%Ⅳ型胶原酶消化分离人胎儿胰腺组织,获得胰腺单个细胞和细胞团。以低糖DMEM+10% NBS+0.08mg/mL 青霉素+0.1mg/mL 链霉素为基础培养液贴壁培养,获得原代上皮样人胎儿胰腺干细胞及少量成纤维细胞。0.25%胰酶+0.04%EDTA 消化传代,并在传代中逐渐消除成纤维样细胞及其它杂细胞,获得纯化的上皮样人胎儿胰腺干细胞。在基础培养液中添加10ng/mL EGF,扩增纯化人胎儿胰腺干细胞。继续消化传代,建立1 例人胎儿胰腺干细胞系,传50 代。人胎儿胰腺干细胞克隆性生长。当培养皿中细胞数较少时,可见多角形的上皮样胰腺干细胞呈典型的单克隆方式生长;干细胞生长至70%融合时,呈铺路石样。接种培养1～4 天,干细胞生长缓慢,5～6 天,进入倍增期。从干细胞生长曲线和1 年以上细胞扩增情况看,该人胎儿胰腺干细胞有无限增殖的趋势。不同浓度血清、EGF 和IGF-Ⅱ对人胎儿胰腺干细胞增殖有不同的影响。以低糖DMEM 为基础培养液,添加10%NBS,能促进人胎儿胰腺干细胞增殖;在低糖DMEM+10%NBS 的基础上,再添加15ng/mL EGF 或10ng/mL IGF-Ⅱ,均更有助于人胎
论文目录:
文献综述
第一章 胰腺干细胞的概念、存在部位及活性表现
1 胰腺干细胞的概念
2 胰腺干细胞的存在部位
2.1 胰腺干细胞存在于胰导管
2.2 胰腺干细胞存在于胰岛
2.3 胰腺干细胞存在于肝脏
3 胰腺干细胞的活性表现
第二章 胰腺干细胞的主要生物学特征
1 胰腺干细胞的形态学特征
2 胰腺干细胞的扩增性
3 胰腺干细胞的主要相关标记分子
3.1 胰肠同源域因子1
3.2 肝细胞核因子3β
3.3 神经原因子3
3.4 酪氨酸羟化酶
3.5 葡萄糖转录因子2
3.6 其它决定性因子
3.7 共表达物
4 胰腺干细胞的分化特性
5 胰腺干细胞的可操作性
第三章 胰腺干细胞分离、培养及鉴定的方法
1 胰腺干细胞的分离方法
1.1 取材的方法与要求
1.2 分离获取胰导管细胞和胰岛细胞的方法
2 原代胰腺干细胞的培养方法
2.1 原代胰导管上皮干细胞的培养
2.2 原代胰岛干细胞的培养
2.3 组织块培养法
3 影响胰腺干细胞分离培养的因素
3.1 消化液
3.2 条件培养基
4 胰腺干细胞的鉴定方法
4.1 形态特征的鉴定
4.2 生长行为的鉴定
4.3 表达特征的鉴定
4.4 分化特性的鉴定
4.5 胰腺干细胞核型分析
4.6 移植胰腺干细胞或其诱导胰岛治疗动物糖尿病
第四章 胰腺干细胞的应用
1 糖尿病概述
2 胰腺和胰岛移植治疗糖尿病的历史与现状
2.1 胰腺器官移植
2.2 胰岛细胞移植
3 胰腺干细胞体外诱导胰岛移植治疗糖尿病
3.1 胰腺干细胞诱导胰岛移植治疗糖尿病的研究概况
3.2 胰腺干细胞体外定向诱导分化为功能性胰岛
3.3 胰腺干细胞体外诱导胰岛移植治疗糖尿病
4 其它干细胞体外诱导胰岛移植治疗糖尿病
4.1 胚胎干细胞
4.2 骨髓干细胞
4.3 肝脏卵圆细胞
实验研究
前言
第五章 人胎儿胰腺干细胞培养体系的建立
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果与分析
2.1 人胎儿胰腺干细胞的分离培养
2.2 人胎儿胰腺干细胞的生长行为
2.3 人胎儿胰腺干细胞的冷冻解冻效果
2.4 不同代人胎儿胰腺干细胞生长曲线
2.5 NBS 浓度对人胎儿胰腺干细胞增殖的影响
2.6 EGF 浓度对人胎儿胰腺干细胞增殖的影响
2.7 IGF-Ⅱ浓度对人胎儿胰腺干细胞增殖的影响
2.8 比较EGF 和IGF-Ⅱ对人胎儿胰腺干细胞增殖的影响
2.9 人胎儿胰腺干细胞染色体核型
3 讨论
3.1 建立人胎儿胰腺干细胞培养体系
3.2 人胎儿胰腺干细胞的生长行为及不同营养成分对其增殖的影响
4 小结
第六章 人胎儿胰腺干细胞的形态和表达特征
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果与分析
2.1 人胎儿胰腺干细胞的形态特征
2.2 不同代人胎儿胰腺干细胞蛋白水平表达特征
2.3 人胎儿胰腺干细胞转录水平的表达特征
3 讨论
3.1 人胎儿胰腺干细胞的形态特征
3.2 人胎儿胰腺干细胞的表达特征
4 小结
第七章 人胎儿胰腺干细胞的分化特性
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果与分析
2.1 人胎儿胰腺干细胞体外定向诱导过程中形态的变化
2.2 人胎儿胰腺干细胞体外定向诱导分化为功能性胰岛β细胞
2.3 人胎儿胰腺干细胞在裸鼠体内的多向分化潜能
3 讨论
3.1 人胎儿胰腺干细胞体外定向诱导分化为功能性胰岛的方法
3.2 人胎儿胰腺干细胞体外定向诱导分化为功能性胰岛
3.3 人胎儿胰腺干细胞体内多分化潜能
4 小结
第八章 人胎儿胰腺干细胞体外诱导胰岛移植治疗大鼠糖尿病
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果与分析
2.1 腹腔注射链脲菌素(STZ)制备大鼠糖尿病模型效果
2.2 人胎儿胰腺干细胞体外诱导胰岛双硫腙(DTZ)染色检测结果
2.3 人胎儿胰腺干细胞体外诱导胰岛移植治疗大鼠糖尿病的效果
3 讨论
3.1 人胎儿胰腺干细胞体外诱导胰岛移植治疗大鼠糖尿病
3.2 建立大鼠糖尿病模型的方法和标准
4 小结
结论
创新点
进一步研究的设想
参考文献
致谢
作者简介
发布时间: 2005-12-22
参考文献
- [1].大鼠β细胞素在胰腺干细胞转分化中的作用[D]. 安家泽.第四军医大学2005
- [2].胰腺干细胞移植治疗1型糖尿病的动物实验研究[D]. 陈波.山东大学2008
- [3].Wnt3a调控猪胰腺干细胞增殖的分子机理[D]. 韩伟.西北农林科技大学2015
- [4].胎鼠胰腺干细胞体内移植治疗1型糖尿病的实验研究[D]. 张悦.华中科技大学2008
- [5].胰岛移植治疗糖尿病的临床前研究[D]. 蔡寒青.中国协和医科大学2008
相关论文
- [1].大鼠胰岛和胰腺干细胞的体外分离和培养[D]. 田井琦.吉林大学2004
- [2].小鼠胰腺导管上皮细胞和骨髓间充质干细胞转分化为胰岛样细胞的实验研究[D]. 秦贵军.重庆医科大学2005
- [3].胰岛移植治疗糖尿病的实验研究[D]. 宋振顺.第四军医大学2005
- [4].大鼠β细胞素在胰腺干细胞转分化中的作用[D]. 安家泽.第四军医大学2005
- [5].骨髓间充质干细胞向胰岛样细胞分化及对糖尿病治疗作用的研究[D]. 李艳华.中国人民解放军军事医学科学院2005
- [6].仔猪胰腺干细胞的分离鉴定[D]. 张慧茹.西北农林科技大学2005
- [7].骨髓基质干细胞诱导分化为胰腺β细胞的研究[D]. 李立人.苏州大学2005
- [8].骨髓干细胞移植治疗糖尿病的初步研究[D]. 张传仓.第一军医大学2005
- [9].骨髓间充质干细胞体外定向诱导成胰岛样细胞及其对大鼠胰腺损伤的修复作用[D]. 刘雅娟.吉林大学2006
- [10].胰腺干细胞移植治疗1型糖尿病的动物实验研究[D]. 陈波.山东大学2008