黄芪注射液对阿霉素诱导的骨髓间充质干细胞凋亡的影响

论文摘要

第一部分:大鼠骨髓间充质干细胞的分离、纯化与鉴定目的:本研究采用密度梯度离心法和贴壁培养法结合,分离纯化骨髓间充质干细胞,为其进一步的分化研究及实际应用提供实验基础。方法:取大鼠股骨、胫骨骨髓,加入密度离心液离心后,接种在25ml培养瓶中,通过体外培养及扩增,在显微镜下观察其细胞形态学特点,并通过免疫荧光及流式细胞仪技术鉴定BMSCs表面标记物,CD44+/CD34的细胞即为BMSCs.结果:接种培养48～72小时后,大部分细胞贴壁,随时间的延长,可见细胞集落式生长,呈成纤维细胞样,免疫荧光鉴定CD44阳性率约为80±4.56%,CD34阳性率约为19±5.21%,进一步传代培养,流式细胞术鉴定CD44阳性率为78±5.34%,CD34阳性率为29±3.13%。结论:利用密度梯度离心法结合贴壁培养法成功地从大鼠骨髓分离CD44+/CD34- BMSCs骨髓间充质干细胞。第二部分:黄芪注射液对阿霉素诱导的大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响目的:初步探讨黄芪注射液（Milkvetch Root Parenteral Solution,MRPS）对阿霉素诱导的大鼠骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells,BMSCs）凋亡的影响,从而为黄芪注射液能否作为BMSCs治疗心血管疾病的辅助治疗提供试验依据。方法:从SD大鼠股骨骨髓中提取BMSCs并鉴定后,加入阿霉素（Adriamycin,ADR）（10μg/l）诱导BMSCs凋亡,同时加入不同剂量的MRPS（4μg/l、40μg/l、400μg/l）与BMSCs共培养12h、24h、48h,试验共分六组,即空白对照组,ADR组、ADR+MRPS（4μg/l、40μg/l、400μg/l）组、MRPS（400μg/l）组。采用MTT法检测细胞增殖,TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡的情况。结果:检测药物作用48小时一组,MTT结果示,阿霉素组与ADR+40μg/L、ADR+400μg/L组吸光度（optical density, OD）比较有显著性差异（n=3,F=83.149,p<0.01）。流式细胞术检测示,ADR组、与ADR+MR（40μg/l、400μg/l）组凋亡率比较差异均有显著性（n=3,F=791.65,p<0.01）;TUNEL检测显微镜下示ADR+MR（40μg/l、400μg/l）组凋亡细胞明显少于ADR组凋亡细胞数,统计结果示其凋亡率比较差异有显著性（n=3,F=612.484,p<0.01）,三种检测结果显示,阿霉素组与ADR+4μg/L组比较,差异无显著性。对于ADR+40μg/L组,培养48小时组OD值与12小时、24小时组比较差异均有显著性（N=3,F=12.7,P<0.01）流式细胞术检测示凋亡率比较差异亦有显著性（N=3,F=14.127,P<0.01或0.05）TUNEL检测示凋亡率同流式结果一致,差异有显著性（N=3,F=14.127,P<0.01或0.05）,三种检测结果示培养12小时组与培养24小时组比较差异无显著性。结论:黄芪注射液剂量依赖性地抑制骨髓间充质干细胞凋亡,且随作用时间延长,抗凋亡作用增强。

论文目录

• 主要缩略语英文索引
• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• ＋/CD34^-的分离、纯化与鉴定'>第一部分 大鼠骨髓间充质干细胞CD44^＋/CD34^-的分离、纯化与鉴定
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 小结
• 第二部分黄芪注射液对阿霉素诱导的骨髓间充质干细胞增殖调亡的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 小结
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 硕士期间已发表及拟发表的文章
• 致谢