蛇床子素的神经保护作用研究

论文摘要

蛇床子素又名甲氧基欧芹酚或欧芹酚甲醚（osthole,OST）,是中药蛇床子中香豆素类化合物的主要成分[1] ,化学名是7-甲氧基-8-异戊烯基香豆素（7-m e t h o x y- 8-[ 3- m e t h y l p e n t -2-e n y 1 ] c o u m a r i n）[2]。对蛇床子素研究发现,其能干扰多种生物酶的活性,影响蛋白的表达,可能具有神经保护的功效[3]一种即早基因Homer1a是突出后致密物质的重要蛋白,可影响代谢性谷氨酸受体（mGluR）的转运、细胞Ca2+通道、ERK1/2、Shank、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）的功能。在脑损伤后,Homer1a蛋白发挥重要作用。本研究利用离体培养的小鼠皮层神经元细胞机械划伤模型和MPP+诱导PC12细胞损伤模型,研究蛇床子素处理后产生的脑保护作用及Homer1a在其中的表达趋势和重要作用,为阐明蛇床子素的神经保护作用并为该药物进一步研发提供可靠的实验依据。实验一蛇床子素对小鼠皮层神经元机械划伤模型的神经保护作用及Homer1a蛋白表达影响的研究目的通过蛇床子素干预离体培养神经元机械划伤模型,观察蛇床子素在神经元机械损伤中的神经保护功能及Homer1a的作用。方法步骤一:小鼠大脑皮层神经元体外培养7天后,建立神经元划伤模型,以乳酸脱氢酶（LDH）检测法检测不同时间点细胞毒性的变化,western-blot法检测caspase3及Homer1a的变化趋势。步骤二:将培养7天的神经元分为空白对照组（Sham组）、单纯机械划伤组（Con组）、蛇床子素干预组（0.05mΜ）;划伤后24小时后采用Western-blot检测各组间Caspase3和Homer1a表达情况。结果小鼠皮层神经元体外培养7 d,光镜下见细胞核大而清晰,自胞体伸出许多突起,突起间互相联系,形成复杂的网状结构。神经元机械划伤24h后,Western-blot结果显示,蛇床子素干预组Caspase3表达明显低于单纯划伤组而高于空白对照组,Homer1a表达则高于单纯划伤组;结论神经元机械损伤后,蛇床子素具有一定程度的保护作用,并且Homer1a表达在蛇床子素神经保护过程中可能发挥重要作用。实验二蛇床子素对MPP+损伤PC12细胞的保护作用的研究及其对Homer1a蛋白表达的影响目的观察蛇床子素（osthole）对1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP+）诱导损伤PC12细胞的神经保护作用及Homer1a的表达趋势。方法将MPP+加入培养的PC12细胞中,建立神经元损伤模型,加入不同浓度的蛇床子素预处理细胞（0.01,0.05,0.1mM）,用MTT法检测细胞活性;以乳酸脱氢酶（LDH）检测法检测细胞毒性的变化;采用Western-blot法检测Homer1a、Bax、Bal-2、细胞色素C和Capase3蛋白的表达。结果蛇床子素可以明显减少MPP+诱导的PC12细胞活性的降低,降低LDH的释放,减少Capase3的表达、减少Bax/ Bcl-2比值的增高以及细胞色素C的释放,并且增加Ho mer1a的表达。结论蛇床子素对MPP+诱导的PC12细胞有保护作用,并且Ho mer1a在该损伤过程中可能发挥一定的保护作用。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 文献回顾
• 1.即早基因 Homer 蛋白的研究进展
• 2. 蛇床子素的研究进展
• 实验一 小鼠脑皮层神经元体外培养及培养神经元划伤模型的建立
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4. 讨论
• 实验二 蛇床子素对小鼠大脑皮层神经元机械划伤模型的神经保护作用及其对HOMER1A 蛋白表达的影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 实验三 蛇床子素对MPP+损伤PC12 细胞的保护作用的研究及其对HOMER1A 蛋白表达的影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献