本文主要研究内容
作者徐晓晖（2019）在《基于多组学研究氧化低密度脂蛋白致内皮细胞氧化损伤的分子机制》一文中研究指出：动脉粥样硬化是动脉壁的慢性炎症过程,通过进行性斑块的形成和动脉管腔的变窄引发心脑血管疾病。当斑块破裂和血栓形成后,常见心血管疾病的表现为急性冠状动脉综合征、心肌梗死或中风。携带低密度脂蛋白(Low density lipoprotein,LDL)的载脂蛋白运载的循环性胆固醇水平提高,将促进动脉粥样硬化和心血管疾病的发生。载脂蛋白结合细胞外基质中负电性的蛋白聚糖引起LDL驻留在内膜,更容易被活性氧或炎症细胞所释放的酶氧化生成氧化低密度脂蛋白(Oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)。Ox-LDL触发内皮细胞粘附分子的表达和趋化因子的分泌,连同血小板趋化因子的沉积共同驱动内膜免疫细胞浸润。动脉壁LDL的沉积是动脉粥样硬化病变的标志。氧化应激水平的提高促进LDL的氧化,ox-LDL通过多种机制参与动脉粥样病变过程。其中,ox-LDL可以破坏内皮细胞功能,而内皮功能紊乱先于动脉粥样硬化发生,是病变的早期事件。一氧化氮(Nitric oxide,NO)在调节血管功能方面发挥着重要功能,导致内皮受损的主要因素之一是NO合成和/或生物利用度降低。Ox-LDL由多种反应性醛类以及过氧化脂类物质构成,具有强氧化性,其诱导的氧化应激严重干扰内皮行使正常生理功能,包括以多种途径造成异常的NO合成和利用。蛋白质的亚硝基化修饰是一种处于动态变化且广泛存在的翻译后修饰,既参与NO的信号传导,又与细胞氧化还原微环境密切相关。据报道ox-LDL可以破坏生物大分子的结构,包括磷酸化和泛素化等翻译后修饰,但是目前还没有研究ox-LDL影响亚硝基化蛋白组的报道。糖萼分布在健康血管内皮表面,在维持血管稳态方面扮演着不容小觑的角色。糖萼主要由糖蛋白和蛋白聚糖构成,蛋白聚糖由核心蛋白和糖胺聚糖(Glycosaminoglycan,GAG)共价连接形成。糖胺聚糖是一类具有异质性的线性多糖,可以发生不同程度的硫酸化修饰。其负电性既可以吸引正电荷的血浆蛋白、生长因子等停靠,又可以排斥不良分子接触内皮,起到屏障和分子筛的作用。糖胺聚糖的功能依赖与其相互作用的蛋白实现,通过调节这些蛋白的结构和活性参与生命活动。对于外界刺激,位于内皮细胞表面的糖萼首当其冲。在内皮中最主要的糖胺聚糖是硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate,HS),约占50%-90%,已有研究表明ox-LDL可以降解糖萼,但是并没有深入研究在此过程中HS在结构和含量的具体变化。糖和蛋白质都是细胞内重要的生物大分子,蛋白质是生命活动的主要承担者,糖作为能量和结构物质参与细胞构成和信号传导。液相色谱和高分辨质谱的联用技术可以实现高质量的色谱分离、高灵敏度和高分辨率的质谱检测,广泛应用于糖和蛋白质的分析领域,包括结构和序列的表征、相互作用的研究和组学层面上的定性定量分析。对于蛋白组学的研究,生物信息学工具不可或缺,借助多学科的交叉运用,将抽象的质谱数据转化为具象的功能语言,有助于深层次的理解和应用。对于糖胺聚糖分析,bottorm-up的分析策略相对成熟,即用酶法或者化学法将完整糖链降解成寡糖,经过液质联用技术表征寡糖结构。本论文选取人脐静脉内皮细胞系(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)细胞系EA.hy926研究ox-LDL致内皮细胞氧化损伤的分子机制。依赖于液质联用的定量方法,并以western blot和生物膜光干涉技术(Bio-layer interferometry,BLI)等技术为辅助,我们从多组学的角度展开研究,分别为蛋白组、亚硝基化修饰组、硫酸乙酰肝素和硫酸乙酰肝素结合蛋白(Heparan sulfate binding protein,HSBP),这四个层次在之前均尚未有报道。其中蛋白组的研究既揭示了ox-LDL导致内皮功能障碍的蛋白基础,又为亚硝基化修饰组提供了修饰蛋白的定量信息,使焦点放在异常亚硝基化修饰本身成为可能,同时还是HSBP筛选的基础。本论文丰富和拓展了当前对ox-LDL致内皮细胞氧化损伤的认知,利于深入了解致动脉粥样病变的分子基础,为今后心血管疾病临床样本的研究提供了有前景的实验方向和可行的技术支持。本论文的主要研究成果如下:1.定量研究了ox-LDL致内皮细胞氧化损伤的蛋白组应用基于二级质谱数据定量的iTRAQ方法结合高分辨质谱技术,分析了ox-LDL刺激下内皮细胞蛋白组的变化,从中筛选出260种差异表达的蛋白。借助生物信息学手段对差异表达蛋白进行功能注释和相互作用网络分析,深入了解并挖掘这些蛋白背后的含义。差异表达蛋白主要是胞外蛋白、膜蛋白和囊泡蛋白,具有酶活性、受体活性和糖胺聚糖结合的能力,参与应对外界刺激、创伤愈合、以及分泌和迁移等内皮细胞重要生理活动。在蛋白相互作用网络分析时发现转录、翻译和血小板脱粒相关的蛋白之间相互作用关系受影响最大。本部分内容用质谱相对定量方法研究了ox-LDL对内皮细胞蛋白组的影响,了解ox-LDL致内皮细胞氧化损伤的蛋白分子机制。2.分析了ox-LDL对亚硝基化修饰相关酶的影响作为一种可逆的氧化性翻译后修饰,蛋白亚硝基化是一种重要的NO信号传导通路,也与细胞氧化还原微环境密切相关。该修饰生理水平的维持是通过修饰和去修饰两个过程的平衡实现的。内皮细胞中与修饰相关的酶是NO合成酶eNOS,运用western blot检测到ox-LDL处理下内皮细胞中eNOS的表达量是减少的。与去修饰有关的酶GSNOR在ox-LDL诱导下的表达量也是明显减少的,但减少程度比eNOS小,这解释了内皮细胞整体亚硝基化蛋白的减少。3.定量分析了ox-LDL刺激下内皮细胞的亚硝基化蛋白组首次将iRAQ定量技术与生物素转化方法进行结合,建立了一种亚硝基化蛋白组的定量研究方法,并首次发现了半胱氨酸侧链巯基对iTRAQ试剂的反应性。本研究的焦点问题在于ox-LDL对于亚硝基化修饰本身的影响,因此在数据处理时排除了蛋白表达量变化引起对应亚硝基化修饰变化的情况。运用生物信息学工具研究了262种异常亚硝基化的蛋白,发现这些蛋白覆盖了从起始、延伸到终止的整个翻译过程。参与mRNA剪接和翻译的蛋白亚硝基化修饰更容易受到氧化应激的影响。经过相互作用网络和分子对接模拟,发现亚硝基化修饰是一种调节蛋白相互作用的分子机制。4.表征了ox-LDL刺激下内皮细胞糖萼中异常的硫酸乙酰肝素内皮细胞糖萼中最丰富的糖胺聚糖是HS,其负电性既为生长因子、血浆蛋白等提供停泊位点,又作为分子筛排斥非必需分子或者具不良效应的蛋白和细胞接触内皮。糖萼作为细胞表面的结构,率先受到外界刺激的干扰。开展这部分研究的基础是观察到ox-LDL处理组内皮细胞表面HS的荧光信号更加致密。利用多反应监测质谱技术对HS结构和含量的变化进行了表征:ox-LDL刺激下的HS含量减少了50%,但是硫酸化修饰(包括O-硫酸和N-硫酸)是增多的。利用电泳技术分析内皮细胞HS分子量的分布,发现分为三个不连续的区域,并且ox-LDL处理组的HS分子量范围更宽,并且低分子量组分含量偏高。因此,ox-LDL确实对内皮细胞表面HS的结构、含量和分子量产生了重要影响,破坏了糖萼的保护功能。5.筛选和分析了ox-LDL刺激下内皮细胞中的重要硫酸乙酰肝素结合蛋白糖胺聚糖一般通过调节与其相互作用的蛋白参与细胞活动。基于蛋白组定量数据,结合蛋白组芯片的信号信息,初步筛选出ox-LDL致内皮损伤过程中有重要作用的潜在HSBP。通过文献描述的结合蛋白特征序列,并将蛋白定位到细胞外,对满足以上条件的蛋白用BLI技术进行验证,由此建立了一套从蛋白组到HSBP的技术路线。基于蛋白组数据的功能富集结果,选择起关键作用的胎球蛋白(Alpha-2-HS-glycoprotein,AHSG)进一步深入研究。通过检测其与不同位置脱硫酸的HS的亲和力,了解不同位置硫酸基团对二者相互作用的贡献。免疫共定位结果显示HS促进内皮细胞对AHSG的内吞作用,可能是动脉粥样硬化病变中所减少的血清AHSG的去路。此外,尝试开发非抗凝肝素的功能时,初步发现其对ox-LDL刺激下的内皮细胞具有一定程度的保护作用,表现为细胞凋亡率下降,这提示非抗凝肝素在干预或者缓解ox-LDL致动脉粥样硬化过程中的潜力。
Abstract
dong mai yu yang ying hua shi dong mai bi de man xing yan zheng guo cheng ,tong guo jin hang xing ban kuai de xing cheng he dong mai guan qiang de bian zhai yin fa xin nao xie guan ji bing 。dang ban kuai po lie he xie shuan xing cheng hou ,chang jian xin xie guan ji bing de biao xian wei ji xing guan zhuang dong mai zeng ge zheng 、xin ji geng si huo zhong feng 。xie dai di mi du zhi dan bai (Low density lipoprotein,LDL)de zai zhi dan bai yun zai de xun huan xing dan gu chun shui ping di gao ,jiang cu jin dong mai yu yang ying hua he xin xie guan ji bing de fa sheng 。zai zhi dan bai jie ge xi bao wai ji zhi zhong fu dian xing de dan bai ju tang yin qi LDLzhu liu zai nei mo ,geng rong yi bei huo xing yang huo yan zheng xi bao suo shi fang de mei yang hua sheng cheng yang hua di mi du zhi dan bai (Oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)。Ox-LDLchu fa nei pi xi bao nian fu fen zi de biao da he qu hua yin zi de fen bi ,lian tong xie xiao ban qu hua yin zi de chen ji gong tong qu dong nei mo mian yi xi bao jin run 。dong mai bi LDLde chen ji shi dong mai yu yang ying hua bing bian de biao zhi 。yang hua ying ji shui ping de di gao cu jin LDLde yang hua ,ox-LDLtong guo duo chong ji zhi can yu dong mai yu yang bing bian guo cheng 。ji zhong ,ox-LDLke yi po huai nei pi xi bao gong neng ,er nei pi gong neng wen luan xian yu dong mai yu yang ying hua fa sheng ,shi bing bian de zao ji shi jian 。yi yang hua dan (Nitric oxide,NO)zai diao jie xie guan gong neng fang mian fa hui zhao chong yao gong neng ,dao zhi nei pi shou sun de zhu yao yin su zhi yi shi NOge cheng he /huo sheng wu li yong du jiang di 。Ox-LDLyou duo chong fan ying xing quan lei yi ji guo yang hua zhi lei wu zhi gou cheng ,ju you jiang yang hua xing ,ji you dao de yang hua ying ji yan chong gan rao nei pi hang shi zheng chang sheng li gong neng ,bao gua yi duo chong tu jing zao cheng yi chang de NOge cheng he li yong 。dan bai zhi de ya xiao ji hua xiu shi shi yi chong chu yu dong tai bian hua ju an fan cun zai de fan yi hou xiu shi ,ji can yu NOde xin hao chuan dao ,you yu xi bao yang hua hai yuan wei huan jing mi qie xiang guan 。ju bao dao ox-LDLke yi po huai sheng wu da fen zi de jie gou ,bao gua lin suan hua he fan su hua deng fan yi hou xiu shi ,dan shi mu qian hai mei you yan jiu ox-LDLying xiang ya xiao ji hua dan bai zu de bao dao 。tang e fen bu zai jian kang xie guan nei pi biao mian ,zai wei chi xie guan wen tai fang mian ban yan zhao bu rong xiao qu de jiao se 。tang e zhu yao you tang dan bai he dan bai ju tang gou cheng ,dan bai ju tang you he xin dan bai he tang an ju tang (Glycosaminoglycan,GAG)gong jia lian jie xing cheng 。tang an ju tang shi yi lei ju you yi zhi xing de xian xing duo tang ,ke yi fa sheng bu tong cheng du de liu suan hua xiu shi 。ji fu dian xing ji ke yi xi yin zheng dian he de xie jiang dan bai 、sheng chang yin zi deng ting kao ,you ke yi pai chi bu liang fen zi jie chu nei pi ,qi dao bing zhang he fen zi shai de zuo yong 。tang an ju tang de gong neng yi lai yu ji xiang hu zuo yong de dan bai shi xian ,tong guo diao jie zhe xie dan bai de jie gou he huo xing can yu sheng ming huo dong 。dui yu wai jie ci ji ,wei yu nei pi xi bao biao mian de tang e shou dang ji chong 。zai nei pi zhong zui zhu yao de tang an ju tang shi liu suan yi xian gan su (Heparan sulfate,HS),yao zhan 50%-90%,yi you yan jiu biao ming ox-LDLke yi jiang jie tang e ,dan shi bing mei you shen ru yan jiu zai ci guo cheng zhong HSzai jie gou he han liang de ju ti bian hua 。tang he dan bai zhi dou shi xi bao nei chong yao de sheng wu da fen zi ,dan bai zhi shi sheng ming huo dong de zhu yao cheng dan zhe ,tang zuo wei neng liang he jie gou wu zhi can yu xi bao gou cheng he xin hao chuan dao 。ye xiang se pu he gao fen bian zhi pu de lian yong ji shu ke yi shi xian gao zhi liang de se pu fen li 、gao ling min du he gao fen bian lv de zhi pu jian ce ,an fan ying yong yu tang he dan bai zhi de fen xi ling yu ,bao gua jie gou he xu lie de biao zheng 、xiang hu zuo yong de yan jiu he zu xue ceng mian shang de ding xing ding liang fen xi 。dui yu dan bai zu xue de yan jiu ,sheng wu xin xi xue gong ju bu ke huo que ,jie zhu duo xue ke de jiao cha yun yong ,jiang chou xiang de zhi pu shu ju zhuai hua wei ju xiang de gong neng yu yan ,you zhu yu shen ceng ci de li jie he ying yong 。dui yu tang an ju tang fen xi ,bottorm-upde fen xi ce lve xiang dui cheng shou ,ji yong mei fa huo zhe hua xue fa jiang wan zheng tang lian jiang jie cheng gua tang ,jing guo ye zhi lian yong ji shu biao zheng gua tang jie gou 。ben lun wen shua qu ren qi jing mai nei pi xi bao ji (Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)xi bao ji EA.hy926yan jiu ox-LDLzhi nei pi xi bao yang hua sun shang de fen zi ji zhi 。yi lai yu ye zhi lian yong de ding liang fang fa ,bing yi western blothe sheng wu mo guang gan she ji shu (Bio-layer interferometry,BLI)deng ji shu wei fu zhu ,wo men cong duo zu xue de jiao du zhan kai yan jiu ,fen bie wei dan bai zu 、ya xiao ji hua xiu shi zu 、liu suan yi xian gan su he liu suan yi xian gan su jie ge dan bai (Heparan sulfate binding protein,HSBP),zhe si ge ceng ci zai zhi qian jun shang wei you bao dao 。ji zhong dan bai zu de yan jiu ji jie shi le ox-LDLdao zhi nei pi gong neng zhang ai de dan bai ji chu ,you wei ya xiao ji hua xiu shi zu di gong le xiu shi dan bai de ding liang xin xi ,shi jiao dian fang zai yi chang ya xiao ji hua xiu shi ben shen cheng wei ke neng ,tong shi hai shi HSBPshai shua de ji chu 。ben lun wen feng fu he ta zhan le dang qian dui ox-LDLzhi nei pi xi bao yang hua sun shang de ren zhi ,li yu shen ru le jie zhi dong mai yu yang bing bian de fen zi ji chu ,wei jin hou xin xie guan ji bing lin chuang yang ben de yan jiu di gong le you qian jing de shi yan fang xiang he ke hang de ji shu zhi chi 。ben lun wen de zhu yao yan jiu cheng guo ru xia :1.ding liang yan jiu le ox-LDLzhi nei pi xi bao yang hua sun shang de dan bai zu ying yong ji yu er ji zhi pu shu ju ding liang de iTRAQfang fa jie ge gao fen bian zhi pu ji shu ,fen xi le ox-LDLci ji xia nei pi xi bao dan bai zu de bian hua ,cong zhong shai shua chu 260chong cha yi biao da de dan bai 。jie zhu sheng wu xin xi xue shou duan dui cha yi biao da dan bai jin hang gong neng zhu shi he xiang hu zuo yong wang lao fen xi ,shen ru le jie bing wa jue zhe xie dan bai bei hou de han yi 。cha yi biao da dan bai zhu yao shi bao wai dan bai 、mo dan bai he nang pao dan bai ,ju you mei huo xing 、shou ti huo xing he tang an ju tang jie ge de neng li ,can yu ying dui wai jie ci ji 、chuang shang yu ge 、yi ji fen bi he qian yi deng nei pi xi bao chong yao sheng li huo dong 。zai dan bai xiang hu zuo yong wang lao fen xi shi fa xian zhuai lu 、fan yi he xie xiao ban tuo li xiang guan de dan bai zhi jian xiang hu zuo yong guan ji shou ying xiang zui da 。ben bu fen nei rong yong zhi pu xiang dui ding liang fang fa yan jiu le ox-LDLdui nei pi xi bao dan bai zu de ying xiang ,le jie ox-LDLzhi nei pi xi bao yang hua sun shang de dan bai fen zi ji zhi 。2.fen xi le ox-LDLdui ya xiao ji hua xiu shi xiang guan mei de ying xiang zuo wei yi chong ke ni de yang hua xing fan yi hou xiu shi ,dan bai ya xiao ji hua shi yi chong chong yao de NOxin hao chuan dao tong lu ,ye yu xi bao yang hua hai yuan wei huan jing mi qie xiang guan 。gai xiu shi sheng li shui ping de wei chi shi tong guo xiu shi he qu xiu shi liang ge guo cheng de ping heng shi xian de 。nei pi xi bao zhong yu xiu shi xiang guan de mei shi NOge cheng mei eNOS,yun yong western blotjian ce dao ox-LDLchu li xia nei pi xi bao zhong eNOSde biao da liang shi jian shao de 。yu qu xiu shi you guan de mei GSNORzai ox-LDLyou dao xia de biao da liang ye shi ming xian jian shao de ,dan jian shao cheng du bi eNOSxiao ,zhe jie shi le nei pi xi bao zheng ti ya xiao ji hua dan bai de jian shao 。3.ding liang fen xi le ox-LDLci ji xia nei pi xi bao de ya xiao ji hua dan bai zu shou ci jiang iRAQding liang ji shu yu sheng wu su zhuai hua fang fa jin hang jie ge ,jian li le yi chong ya xiao ji hua dan bai zu de ding liang yan jiu fang fa ,bing shou ci fa xian le ban guang an suan ce lian qiu ji dui iTRAQshi ji de fan ying xing 。ben yan jiu de jiao dian wen ti zai yu ox-LDLdui yu ya xiao ji hua xiu shi ben shen de ying xiang ,yin ci zai shu ju chu li shi pai chu le dan bai biao da liang bian hua yin qi dui ying ya xiao ji hua xiu shi bian hua de qing kuang 。yun yong sheng wu xin xi xue gong ju yan jiu le 262chong yi chang ya xiao ji hua de dan bai ,fa xian zhe xie dan bai fu gai le cong qi shi 、yan shen dao zhong zhi de zheng ge fan yi guo cheng 。can yu mRNAjian jie he fan yi de dan bai ya xiao ji hua xiu shi geng rong yi shou dao yang hua ying ji de ying xiang 。jing guo xiang hu zuo yong wang lao he fen zi dui jie mo ni ,fa xian ya xiao ji hua xiu shi shi yi chong diao jie dan bai xiang hu zuo yong de fen zi ji zhi 。4.biao zheng le ox-LDLci ji xia nei pi xi bao tang e zhong yi chang de liu suan yi xian gan su nei pi xi bao tang e zhong zui feng fu de tang an ju tang shi HS,ji fu dian xing ji wei sheng chang yin zi 、xie jiang dan bai deng di gong ting bo wei dian ,you zuo wei fen zi shai pai chi fei bi xu fen zi huo zhe ju bu liang xiao ying de dan bai he xi bao jie chu nei pi 。tang e zuo wei xi bao biao mian de jie gou ,lv xian shou dao wai jie ci ji de gan rao 。kai zhan zhe bu fen yan jiu de ji chu shi guan cha dao ox-LDLchu li zu nei pi xi bao biao mian HSde ying guang xin hao geng jia zhi mi 。li yong duo fan ying jian ce zhi pu ji shu dui HSjie gou he han liang de bian hua jin hang le biao zheng :ox-LDLci ji xia de HShan liang jian shao le 50%,dan shi liu suan hua xiu shi (bao gua O-liu suan he N-liu suan )shi zeng duo de 。li yong dian yong ji shu fen xi nei pi xi bao HSfen zi liang de fen bu ,fa xian fen wei san ge bu lian xu de ou yu ,bing ju ox-LDLchu li zu de HSfen zi liang fan wei geng kuan ,bing ju di fen zi liang zu fen han liang pian gao 。yin ci ,ox-LDLque shi dui nei pi xi bao biao mian HSde jie gou 、han liang he fen zi liang chan sheng le chong yao ying xiang ,po huai le tang e de bao hu gong neng 。5.shai shua he fen xi le ox-LDLci ji xia nei pi xi bao zhong de chong yao liu suan yi xian gan su jie ge dan bai tang an ju tang yi ban tong guo diao jie yu ji xiang hu zuo yong de dan bai can yu xi bao huo dong 。ji yu dan bai zu ding liang shu ju ,jie ge dan bai zu xin pian de xin hao xin xi ,chu bu shai shua chu ox-LDLzhi nei pi sun shang guo cheng zhong you chong yao zuo yong de qian zai HSBP。tong guo wen suo miao shu de jie ge dan bai te zheng xu lie ,bing jiang dan bai ding wei dao xi bao wai ,dui man zu yi shang tiao jian de dan bai yong BLIji shu jin hang yan zheng ,you ci jian li le yi tao cong dan bai zu dao HSBPde ji shu lu xian 。ji yu dan bai zu shu ju de gong neng fu ji jie guo ,shua ze qi guan jian zuo yong de tai qiu dan bai (Alpha-2-HS-glycoprotein,AHSG)jin yi bu shen ru yan jiu 。tong guo jian ce ji yu bu tong wei zhi tuo liu suan de HSde qin he li ,le jie bu tong wei zhi liu suan ji tuan dui er zhe xiang hu zuo yong de gong suo 。mian yi gong ding wei jie guo xian shi HScu jin nei pi xi bao dui AHSGde nei tun zuo yong ,ke neng shi dong mai yu yang ying hua bing bian zhong suo jian shao de xie qing AHSGde qu lu 。ci wai ,chang shi kai fa fei kang ning gan su de gong neng shi ,chu bu fa xian ji dui ox-LDLci ji xia de nei pi xi bao ju you yi ding cheng du de bao hu zuo yong ,biao xian wei xi bao diao wang lv xia jiang ,zhe di shi fei kang ning gan su zai gan yu huo zhe huan jie ox-LDLzhi dong mai yu yang ying hua guo cheng zhong de qian li 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自山东大学的徐晓晖，发表于刊物山东大学2019-07-16论文，是一篇关于内皮细胞论文,氧化损伤论文,亚硝基化蛋白组论文,硫酸乙酰肝素论文,硫酸乙酰肝素结合蛋白论文,山东大学2019-07-16论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自山东大学2019-07-16论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：内皮细胞论文; 氧化损伤论文; 亚硝基化蛋白组论文; 硫酸乙酰肝素论文; 硫酸乙酰肝素结合蛋白论文; 山东大学2019-07-16论文;